小鼠脑微血管内皮细胞的培养及其生物学行为初探.pdfVIP

南京中医药大学学报 2012年 3月第 28卷第 2期 JOURNALOFNANJIb,UUNIVb3~I75OFTCVIVd．嚣No．2 2012 139 小鼠脑微血管内皮细胞 的培养及其生物学行为初探 张畅斌 ，陆茵 ，李沧海。，隋峰 ，李兰芳。，郭淑英 ，姜延 良 (1．南京中医药大学药学院，江苏 南京 210046；2．中国中医科学院中药研究所唐氏中药研究中心，北京 100700) 摘要 ：目的 建立一种简捷 易行的小鼠脑微血管 内皮细胞体外培养方法，并观察其在 IL-1t?刺激下 PGE分泌情况。方法 通 过对以往文献报道方法的改进 ，使用 “二次过筛法”成功培养小鼠脑微血管 内皮细胞 ，并用免疫细胞化学法检测其Ⅷ 因子相关 抗原的表迭情况 ，鉴定血管 内皮细胞 的纯度 。使用EIIsA法检测其在 IL一117刺激下PGEz的分泌情况 。结果 该法培养 的细 胞具备小鼠脑微血管内皮细胞 的形态 ，可见细胞融合 ，95 以上 的细胞Ⅷ因子相关抗原表达阳性 。且其 PGEz的分泌与 IL一1p 的刺激呈现 良好的时效、量效线性关系。结论 该法能简捷地培养小鼠脑微血管 内皮细胞 ，所培养细胞保留有分泌 PGEz的 生物学行为，可用于脑血管疾病相关研究。 关键词 ：脑微血管 内皮细胞 ；培养 ；前列腺素 E 中图号 ：R965 文献标 志码 ：A 文章编号 ：1672—0482(2012)02—0139—04 PrimaryCultureofM ouseCerebralM icovascularEndothelialCellanditsBiologicalBehaviourStudy ZHANGChang-bin 一，LUYin ，LICang—hai，SUIFeng ，LILan—fang ，GUOShu-ying ，JIANG Ting-liang f1．SchoolofPharmacy，Na ing UniversityofChineseMedicine，Nanjing，210046，China 2．TangCenterforHerbal MedicineResearch，InstituteofChineseMateriaMedica，ChinaAcademyofChineseMedicalSciences，Beijing，100700， China) ABSTRACT：OBJECTIVE To establish asimpleprimary culture method ofmouse cerebralmicrovascularendothelialcells (mCMEC)andfurtherprimarilyinvestigateitsPGE2secretioncharacter．METHODS ThemCM EC wasculturedbydouble filtration，anddetectedthesecretionofPGE2stimulatedbyIL-I~．RESULTS Theculturedcellsshowedthetypicalmorpho— logicalfeaturesofmousecerebralmicrovascularendothelialcells．andimmunocytochem istrydemonstratedmorethan 95 of culturedcellswerepositiveforVonW illebrandfactor(VWF)．ThesecretionofPGE2stimulatedbyIL-113showedobviously lineartime／dose—effectrelation．CONCLUSION ThismethodforprimarycultureofmCMECissimple，andfitsforcerebrovas— culardiseasestudy． KEY WORDS：cerebralm icrovascularendothelialcells；primaryculture；prostaglandinE2 脑微血管内皮细胞 ，是研究脑血管疾病 的重要 题 。但本法血管段的得率相对较低 ，可 以通过适 当 工具 。目前小 鼠脑微血管内皮细胞的培养方法，主 增加动物数来解决这个问题 。脑微血管内皮细胞是 要有密度梯度离心法 [1和过筛法 ]。前