一种用磷酸钙法高效转染HEK293T细胞方法的建立_陈晓.pdfVIP

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2015-08-18 发布于重庆
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一种用磷酸钙法高效转染HEK293T细胞方法的建立_陈晓.pdf

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一种用磷酸钙法高效转染HEK293T细胞方法的建立_陈晓.pdf

35 　5 　 35(5):807～ 810 　 2005 9 　 PERIODICAL OF OCEAN UNIVERSIT Y OF CHINA Sept., 2005 HEK 293T 1 2 1 1 陈　晓 , 蒋捍东 , 路新枝 , 于文功 (1., , , 266003;2. , 266003) 　:　lacZ-pShuttle HEK 293T , , pH 、DNA 、。 6h , 0h 584.4%; 4.5min , 130.8%。 , 1 HEK 293T , 。 :　;;X-gal :　 813.4　　　　　　:　A　　　　　　:　1672-5174(2005)05-807-05 　　DNA , ;X-gal 1mg/mL X-gal , (Sigma);0.5%;(Pharmacia)。。 Graham [1] 1.2 1973 , - 1.2.1 lacZ-pShuttle 质粒用磷酸钙转染法转染 HEK [2-3] DNA , 293T 细胞　　60mm HEK 293T , 。 50%, 3h 。 10mL , :ddH O 445μL, 2.5mol/L CaCl 50μL, 2 2 , lacZ-pShuttle DNA 5μL, 。 , , DNA 。, [4-6] , 500μL 2×HBSP , 30min。 , , 2 , DNA-CaPi , , 37℃ 30min, 1mL 10% FCS , lacZ-pShuttle DMEM 。37 ℃5%CO , 2 HEK 293T , , 10%FCS DMEM 5mL, 3 5 10 ～10 。 [7] 37℃5%CO 48h。X-gal β- 2 1　 , 1×PBS 2 , 0.5% 15min, 1×PBS 3 1.1