猴头菌转化银杏叶提取物EGB条件的研究.pdfVIP

猴头菌转化银杏叶提取物(EGB)条件的研究。 吴其飞 黄达明 管国强 张志才 崔凤杰 赵杰文 (江苏大学食品与生物工程学院，镇江，212013) 摘要 以抑制非酶糖基化反应为指标，研究了猴头茵转化银杏叶提取物的培养基组成和培养条件对其活性的 影响。研究表明，葡萄糖是最适合的碳源，发酵液抑制率达到94．5％；氮源以蛋白胨效果最好，其抑制率达 94．5％；以麸皮和玉米粉为复合营养源的猴头发酵液同样提高了抑制率。进一步进行正交实验，得到猴头菌转 化银杏叶提取物培养基的较佳组成为：葡萄糖2％、蛋白胨0．4％、麸皮2％，玉米粉1．5％，EGB0．5％，KH2P吼 0．012％，Mg鼢0．006％，QIa瑰1％。在此条件下，获得最大抑制非酶糖基化活性为98．1％，比优化前得到显著 提高。 关键词优化，生物转化，非酶糖基化反应，银杏叶粗提物，猴头菌 猴头菌(H≥一c沈meri撇循“s)是著名的药食兼用 1材料和方法 菌，其性平味甘，具有助消化、利五脏的功能【1j。研 究表明，猴头菌具有提高机体耐缺氧能力，提高心血 1．1材料与仪器 输出量，加速血液循环，抑制肿瘤细胞生长等作用，尤 1．1．1茵种 其对胃粘膜有较好的保护作用心~5J。 猴头菌，购于中国农业科学研究院菌种保藏中 对具有药效的一些已知其结构的化合物进行生 心。 物转化和修饰是目前研究的一个热点。同时对中药 1．1．2主要仪器 进行发酵改造，改变药物利用度以产生新的治疗作 往复式摇床，镇江格瑞生物工程公司；Cary荧光 用，或增强原有疗效，扩大用药品种，也是目前生物转 分光系统，美国瓦里安公司。 1．1．3发酵培养 化研究的重点之一16~8]。银杏叶提取物(岱破go 6izo施L 将猴头菌接种到麸皮固体培养基[m(麸皮)：m extract，EGB)是从银杏叶中提取的活性物 质，具有改善心脑血管循环，保护肝脏提高机体免疫 (水)=1：1]，培养3～7d后，转接人种子培养基(g／ 功能等作用【9]。我们在前期工作中，进行了多株菌 r／min培养1～2 种发酵转化EGB试验，结果表明，以猴头菌发酵时， 28℃，150 d，转接人发酵培养基(g／ 能有效地转化银杏叶提取物(EGB)，对非酶糖基化反L)：麸皮10，玉米粉10，葡萄糖20，蛋白胨4， r／ 应、a一糖苷酶的抑制率以及对自由基清除率等体外功 m飚1．2，Mg鼢O．6，EGB0．5％，27℃150 能的作用也明显增强(另文发表)。 min培养7d。以不添加EGB作为对照。发酵结束 发酵工艺条件对于生物转化的效率同样重要，通 后离心发酵液，取上清液，用于分析非酶糖基化反应， 过工艺条件优化，一方面使猴头菌发酵更有利于猴头 同时取0．5％浓度的EGB作为空白对照。 菌本身有益产物的生成；另一方面使EGB向有利的 1．2体外非酶糖基化反应测定方法 方向转化，减少副产物生成。但药用真菌转化中药银 根据文献进行适当修改[10]，具体步骤为：采用反 杏叶提取物的工艺条件的相关研究的国内外报道得 应液为含有121119／n儿乙二醛，10mg／n1L牛血清白 不多，文中主要以对非酶糖基化反应抑制率为指标， 蛋白和2mg／H儿叠氮化钠的0．2nlol几pH7．4的 对猴头转化EGB的工艺条件进行探讨优化，为更好 磷酸缓冲液。将1nlL磷酸缓冲液和lmL样品溶液 地开发猴头菌生物转化银杏提