HPLC溶剂效应.docVIP

样品溶剂效应 很多因素可以导致峰形变差。样品溶液的组成与进样体积很可能就是导致此种现象的原因。问题色谱图上较早洗脱的峰扭曲变形或者开叉，与此同时较晚洗脱的峰则较为尖锐与对称，这些现象显示一个比较特殊的起因――样品溶液的溶剂很可能强于流动相。此种强溶剂效应的例子在图10－1A中可见。此处的样品溶液的溶剂是100％乙腈（100％的强溶剂），而流动相的组成则较弱，18％的乙腈与72％的水。第一个峰是开叉的，并且与第二个峰相比，明显地变宽了。当样品溶液的溶剂变成流动相时，所有的峰形都改善了，且变得尖锐。见图10－1B。解释当样品进样时,有可能出现峰展宽,最佳的样品溶液组成和体积将会保持在10%甚至更低,在这个例子里,当样品溶剂与流动相溶剂强度不同时,换句话来说,也就是样品未用流动相溶解,因此,有些样品分子溶解在强溶剂(100%ACE),并随强溶剂流过柱子,而有些则溶解在流动相中,从而导致峰分叉.当样品与流动相强度相差较小,进样影响也会小,第一个峰可能会宽于第二个峰,而当这种展宽导致必要的分离度降低时,这样情况应引起注意,在图10-2A中,使用一根短柱,和5UL进样,这与最佳进样体积4UL相近,用了极性更强的溶剂导致分离度明显的降低,从2.1降到1.5(如图10-2B),分离度为2或更大是评估一个完善方法的一个必要参数,也是每天方法的验证参数,1.5只是一个基本的分离度,任何一个方法或一根柱子都必需满足这个条件,当进样为一倍时,也就是10UL时,分离度更一步降低,此方法就不行了溶剂峰未用流动相溶解的样品溶剂峰还是会有点的。流动相 也出峰的，基线就是稳定流速下的流动相通过检测池的吸收度，即流动相中各物质的混合吸收度。理论上来说，只要进入检测池中的物质浓度发生变化，吸收即会发生变化。因此当你进样时，由于单位时间通过检测池的流动相的量发生了变化，那么相应的吸收度也会发生变化，因此在你的色谱图中的表征就是出峰了。这也就是通常液相色谱中的死保留时间或死体积的表征。当然，该吸收峰的大小，时间应该与你所用的流动相组分，柱填料，检测波长相关。使用低波长检测条件时这种现象尤其明显。特别需要注意的是水是有吸收的，特别是非超纯水，通常表现为一个倒峰。 进样后的管路与与进样前平衡的管路是有一段分开的，而在这一段里的流动相成份与其他相比相对封闭，只在进样后流入系统，其成份就会与管路其他部分有偏差，成分的偏差就会造成有吸收差异，并且进样后还加入了样品里的溶剂，（溶剂相比于样品出峰很早），就有了溶剂峰，这个溶剂峰不仅包括了样品溶剂还有原先管路里溶剂。 流动相和稀释剂选择的时候一般就要求使用在检测波长没有响应或响应很低的试剂，比如使用UV检测器的时候一般是乙腈/甲醇；操作中空白进的就是稀释剂，本身不会出峰的；不过只要进样就会有系统峰出现，和使用什么溶剂没有什么关系；出峰时间很早，基本上不会有更早的峰了（死时间）；只要是梯度，一般在梯度回到起始比例平衡系统的时候也会有系统峰；任何物质都不应该在这之后出峰；你说的溶剂是指稀释剂？选择稀释剂的时候应尽可能的选择和流动相相同的；如果因为溶解度等问题，选择其他稀释剂，那么有的稀释剂就会出峰；至于出峰时间就不好说了，各种不同的溶剂在不同方法上出峰时间是不同的。