皮质醇对黄颡鱼头肾巨噬细胞呼吸爆发活动的影响.pdfVIP

第2 7 卷 第 6 期 华 中 农 业 大 学 学 报 Vol. 27 No . 6 2008 年 12 月 Journ al of Hu azhong A gricu ltura l Un iver sity Dec. 2 00 8 74 9~ 7 54 * 刘小玲 葛海燕 田 珍 顾泽茂 雷曼红 ( 430070) 用Per coll 连续密度梯度离心法分离黄颡鱼头肾巨噬细胞 经含0. 1% 牛血清的L2 15 培养液中培养 在 光镜和电镜下观察其形态、超微结构和吞噬作用; 采用硝基四氮唑蓝(N BT) 与多孔酶标仪检测细胞在佛波豆蔻酸 乙酯( P MA ) 刺激下产生的呼吸爆发 并观察外源皮质醇对黄颡鱼体内外头肾巨噬细胞呼吸爆发活动的影响。结果 7 表明: 每尾黄颡鱼可分离出1. 2~ 1. 6 mL 浓度为1@10 cell s/ mL 的高纯度头肾巨噬细胞; 培养3~ 18 h 后 贴壁纯 化的头肾巨噬细胞达到95%~ 98% ; 分离培养的头肾巨噬细胞具有巨噬细胞的形态结构特征 对福尔马林灭活的 金黄色葡萄球菌( F2 SA ) 的吞噬率达95% 以上。PMA 刺激分离的头肾巨噬细胞产生显著的呼吸爆发活动。在较 高浓度和较长作用时间情况下 外源皮质醇对黄颡鱼体内外头肾巨噬细胞的呼吸爆发均产生抑制作用。 黄颡鱼; 巨噬细胞; 分离培养; 吞噬作用; 外源皮质醇; 呼吸爆发 Q 959 . 4 6 A 1( 2008) 062 07492 06 头肾是鱼类重要的淋巴组织 含有丰富的巨噬 59~ 74 g 体长174~ 181 mm) 运往实验室内养鱼系 [ 123] 细胞 。头肾巨噬细胞的分离培养和功能检测已 统 随机平均分配在12 个水族缸中 驯养 30 d 后进 [ 1] 成为研究鱼类免疫机能及其调节机制 、监测和评 行实验。1 组用于头肾巨噬细胞形态结构与吞噬作 [ 4] [ 5] 价水质 、筛选鱼类免疫刺激剂的重要手段 。呼 用的观察; 2 组用于呼吸爆发测定条件的确定; 2 组 吸爆发是巨噬细胞杀灭吞噬微生物的重要机制之 用于不同皮质醇浓度对体外培养的头肾巨噬细胞呼 [ 6] - 一 PMA 诱导细胞生成的O2 量是衡量细胞杀 吸爆发活动影响的观察; 7 组用于腹腔注射皮质醇 [ 1] 菌能力或机体健康状况的重要指标 。 对体内头肾巨噬细胞呼吸爆发活动影响的观察。驯 应激与养殖鱼类疾病的发生和发展关系密切 养期间水温为25~ 28 e 水源为充分爆气的自来 应激激素 尤其是皮质醇对鱼体免疫机能的影响已 [ 7] 水 溶氧保持在 6 mg/ L 非离子氨维持在 0 . 01 成为国内外学者关注的对象 。黄颡鱼( Pel2 mg/ L左右。日投饵率为 3% 分 2 次