黄斑姜中期染色体CPD染色和45SrDNA荧光原位杂交分析.pdfVIP

第 30卷 第 2期 怀化学院学报 Vo1．30．No．2 2011年 2月 J0URNALOFHUAIHUA UNIVERSITY Feb．，2011 黄斑姜中期染色体 CPD染色和 45SrDNA荧光原位杂交分析 赵丽娟 ， 郭 敏 (怀化学院 1．生命科学系； 2．民族药用植物资源研究与利用湖南省重点实验室 3．湘西药用植物与 民族植物学湖南省高校重点实验室 ， 湖南 怀化 418008) 摘 要 ：为 了对黄斑姜 (ZingibertTavo—maclatumS．Q．Tong．)的染色体进行识别并对该物种基 因组的结构进行 初步研 究，利用PI和 DAPI组合 (CPD)染色和45SrDNA探针荧光原位杂交对 中期染色体进行 了分析 ．结果显示 ，黄 癍姜具有 2对45SrDNA位 点，分别位于第 3、4号染色体 的短臂 ，对应于相应染色体上 的显著 的 CPD带 区 ．基于 rDNA位 点和染色体测量数据 ，建立 了黄斑姜的准确而详细的分子细胞遗传学核型 ．黄斑姜核型公式为 2n=2X=22= 12m+6sm+4st(SAT)，其核 型不对称性为 2B型 ． 关键词 ：黄斑姜 ； 核型 ； CPD染色； 45SrDNA； 荧光原位杂交 中图分类号 ：Q343 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671—9743 (2011)02—0045—03 黄斑姜 (Zingiberflavo—maculatumS．Q．Tong)为 冰醋酸 (3：1)于 4℃固定过夜 ．固定 的根尖水洗后用 姜科 (Zingiberaceae)姜属 (ZingiberBoehm．)植 物 ． 1％ 的 纤 维 素 酶 (Cellulase RS)、1％ 的 果 胶 酶 我 国现有 的黄斑姜大都产云南南部 的勐腊 、景洪…； (PectolyaseY23)及 1％的蜗牛酶 (Cytohelicase)的混合 生于海拔 580—1500米 的常绿 阔叶林 下 ，花期 7—8 液 (用柠檬酸缓冲液配制 ，DH4．5)于 28℃酶解 6h． 月 ，果期 9～12月 ．迄今为止 ，对黄斑姜 的研究大 多 火焰干燥法制片 ．染色体制片置 一20℃贮存备用 ． 是形 态学 、栽 培技 术 、营 养价 值 和保 健作 用 等 方 CPD染 色参照佘朝 文等 的方法进行_5．观察 在 面 一31，核型分析 、DNA物理定位和基 因组结构分析 OlympusBX60荧 光显微镜 下进 行 ，用 紫外光滤色 片 的报道很少 ，因此对其进行分子细胞遗传学研究 十分 (uv)观察 DAPI染色 ，用绿色激发滤色片 (WG)观察 必要 ． PI染 色 ．利用 冷 凝 CCD 照相 系统 (CoolSNAPEZ， 本研究取新生根尖分生 区作为材料 ，采用去壁低 Photomatries)和 MetMorph软件拍摄和合成照片 ． 渗火焰干燥制片法 制备形态 良好 的有丝分裂 中期染 荧光原位杂交在 已进 行 CPD的染 色体装 片上进 色体 ，并采用改 良的 CPD染色技术和 45SrDNA荧光原 行 ．原位杂交和信号检测按佘朝文的方法l5J进行 ．染色 位杂交技术对黄斑姜 的染色体进 行分析 ，为识别黄斑 体用 DAPI复染 ，用 OlympusBX60荧光显微镜观察染色 姜的染色体提供新 的标记 ，并结合染色体常规测量 ， 体和杂交信号 ，用冷凝 CCD照相系统 (CoolSNAPEZ， 建立其分子细胞遗传学核型 ． Photomatries)和 MetMorph软件拍摄和合成照片 ． 图片处理和染色体测量使用 AdobePhotoshop软件 1 实验材料与方法