野木瓜注射液对小鼠皮层神经细胞的抗氧化保护作用.pdfVIP

第40卷第 1期 上海师范大学学报(自然科学版) Vo1．40．No．1 2011年 2月 JournalofShanghaiNormalUniversity(NaturalSciences) Feb ．，2011 野木瓜注射液对小鼠皮层神经细胞的 抗氧化保护作用 周丽娜，叶文博 (上海师范大学 生命与环境科学学院，上海 200234) 摘 要：研究了野木瓜注射液(IS)对小鼠大脑皮层神经细胞氧化损伤的保护作用．在细胞培 养液中加入 100i~mol／LH，O，和不同浓度 Is，培养数 日后通过观察细胞的形态变化，检测细胞 外液 LDH的活力，胞 内超氧化物歧化酶(SOD)的活性，测定细胞活性来观测 IS对氧化受损神 经细胞的保护作用，并通过脱氧核糖法对 IS的羟 自由基 (·OH)清除率进行测定．结果表 明： 浓度在25～300mg／L，IS均能抑制神经细胞 的氧化损伤 ，神经细胞 SOD酶活力上升，细胞外 液LDH活力降低 ，浓度为 100mg／L时效果最显著．与阳性对照甘露醇相 比，Is有较高的 ·OH 清除率．Is有较高的抗氧化能力，能有效抑制HO 导致的皮层神经细胞的损伤． 关键词 ：野木瓜注射液；皮层神经细胞 ；氧化损伤；抗氧化 中图分类号：Q954．6；R931．7 文献标识码 ：A 文章编号：1000-5137(2011)O1-0080-05 野木瓜注射液 (IS)是由野木瓜 (StauntoniachinesisDC)经过水提，乙醇萃取而制得．目前在临床上 被用来治疗神经性头痛、关节痛、坐骨神经痛等 J，有研究表明IS对大 鼠隐神经内的轴膜和髓鞘产生 影响 ]，对缺血清缺氧的脊髓神经细胞有保护作用 ．野木瓜含有丰富的黄酮类和皂甙类物质 ．一 般来讲，黄酮类和皂甙类物质都具有较强的抗氧化能力 卜 ．目前，还没有关于野木瓜注射液抗氧化能 力的研究，因而本实验 旨在研究 Is的抗氧化能力和对氧化应激情况下的皮层神经细胞保护作用，并初 步讨论其作用机制． 1 材料与方法 1．1 材 料 DMEM／F12购于GIBCO公司，胎牛血清购于杭州 四季青生物有限公司，新生昆明幼鼠购于上海复 旦大学医学院，阿糖胞苷、多聚赖氨酸(poly．L．1ysine)，胰酶购 自Sigma公司，DnaseI购 自Applichem公 司．SDS、M1-r购于上海捷瑞生物工程有限公司，野木瓜针剂(2mL等于5g原生药)购 自广东和平制药 厂 ，LDH，SOD试剂盒购于南京建成生物有限公司． 1．2 原代小鼠大脑皮层神经细胞的培养 取新生24h的昆明小鼠，乙醇消毒后，在无菌条件下剪开头部皮肤，暴露全脑，剔除血管和脑膜，分 离出两侧的大脑皮层，去除海马体与纹状体，置于冰冷的D—Hanks缓冲液 (Mg¨、Ca¨一free)．用 收稿 日期 ：2010-09-27 基金项 目：上海师范大学科研项 目(sI(200715) 作者简介：周丽娜 (1986一)，女，上海师范大学生命与环境科学学院硕士研究生 ；叶文博 (1951一)，男 ，上海师范大 学生命与环境科学学院教授． 通信作者 第 1期 周丽娜 ，叶文博：野木瓜注射液对小鼠皮层神经细胞的抗氧化保护作用 81 1．25％的胰酶与DMEM／F12按 1：1混合，37％，消化 15min．用含20％胎牛血清的DMEM／F12来终止 消化，加入 10IxLDnaseI，吹打均匀至无 明显团块，1000r／min离心 5min．用 DMEM／F12培养基 (含 10％胎牛血清)重悬细胞，然后过400目细胞筛，按接种密度为 1×10／mL，接种于预先用 100Ixg／mL poly．L．1ysine包被的24孔板或 96孔板内．置于37~C，5％C0 培养箱 内．48h后加入 5txmol／L阿糖胞 苷，作用 1～2d，抑制胶质细胞的增长．此后每周半换液 2次． 1．3 药物处理 取生长 良好的培养至6d的大脑皮层神经细胞，进行氧化损伤和药物保护实验．野