快速测定半胱氨酸含量方法地研究.docVIP

毕 业 论 文 2014届 快速测定半胱氨酸含量方法的研究 学生姓名 卓芸芸 学 号 系 别 化学化工学院 专业班级 药学102 指导教师 边可君 完成日期 2014年5月1日 快速测定半胱氨酸的含量方法研究 摘 要 钙黄绿素是一种具有荧光性的物质，在pH 8.0 的KH2PO4-NaOH 缓冲液中，Cu( Ⅱ) 与钙黄绿素配位引起荧光猝灭。由于半胱氨酸与Cu( Ⅱ) 的亲和力强，可从钙黄绿素-Cu( Ⅱ) 的络合物中夺取Cu( Ⅱ) 而使钙黄绿素游离出来，从而使体系的荧光得以恢复，并且荧光恢复的程度与加入半胱氨酸的量在一定范围内呈线性从而可以测定半胱氨酸的含量。法的回归线性方程为：y=22.475x-64.1 为：0.34% 回收率为：101.9% 关键词 半胱氨酸；钙黄绿素-铜配合物；荧光光度分析方法 Study on the method of rapid determination of cysteine content ABSTRACT Calcein is a fluorescent substance, KH2PO4 - NaOH in pH 8.0 buffer, Cu (Ⅱ) and calcein ligand fluorescence quenching.Due to cysteine and Cu (Ⅱ) affinity is very strong, can from the calcein - Cu (Ⅱ) win Cu complex (Ⅱ) and make the calcein freed,So that the system of fluorescence was restored, and the degree of fluorescence restoration and the quantity of adding cysteine in a certain range is linear.So that it can determine the content of cysteine.This experiment in the calcein with copper ions 1:1,System time after 30 min,Excitation spectrum 493 nm,Emission spectrum determination under 510nm,The method for the return of the linear equation :y=22.45x-63.6, r:0.34%,The recovery rate of:101.9%. KEY WORDS cysteine ; Calcein - copper complexes ; Fluorescent photometric analysis method 目 录 摘 要 I ABSTRACT II 目 录 III 1绪论 1 1.1常见的测定方法 1 1.1.1 HPLC法测定半胱氨酸的含量 1 1.1.2 分光光度法测定半胱氨酸的含量 1 2 实验部分 5 2.1 仪器、药品、试剂 5 2.2 实验步骤 5 2.2.1 储备溶液配制 5 2.2.2 体系的激发和发射光谱 5 2.2.3.钙黄绿素及铜离子浓度比对荧光强度的影响 6 2.2.4缓冲溶液pH对荧光强度的影响 6 2.2.5反应时间对荧光强度的影响 6 2.2.6 标准曲线的绘制及线性关系考察 6 2.2.7 精密度实验 7 2.2.7 回收率实验 7 2.2.8 样品半胱氨酸含量的测定 7 3 实验结果与讨论 7 3.1 磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液的配制 7 3.2.2 缓冲溶液pH对荧光强度的影响 9 3.2.3 反应时间对荧光强度的影响 10 3.2.4 半胱氨酸标准曲线 11 3.2.5 钙黄绿素及铜离子浓度比的选择 12 3.2.7 回收率的测定 13 3.2.8 样品溶液的测定 14 4 结论 14 致 谢 17 1绪论 半胱氨酸为含硫氨基酸结构式HSCH2CH (NH2 ) COOH半胱氨酸含有巯基(- SH) 胱氨酸含有二硫键(- S- S- ) 二者可以相互转变，蛋白质中两个半胱氨酸残基之间形成的二硫键对维持蛋白质的结构具有重要作用[1于其独特的结构，在动物体内起着营养和免疫相关的重要生理功能。此外半胱氨酸有刺激前T 淋巴细胞分化为成熟的淋巴细