应用基因芯片技术检测人脐带血CD34细胞体外扩增巨核细胞基因表达.pdfVIP

·170· ．实验基础研究． 应用基因芯片技术检测人脐带血cD五 细胞体外扩增的巨核细胞基因表达 何吉 王芳 朱发明 秦斐 陈舒刘晋辉 吕杭军 严力行 【摘要】 目的研究人脐带血cD立细胞体外扩增巨核细胞的基因表达，从分子水平探讨巨核细 胞的表达机制。方法 采用密度梯度离心法和免疫磁珠分选系统获取人脐带血CD三细胞。 100 ng／mlTPO诱导培养12d后，应用抗CD4]单克隆抗体免疫磁珠法分选巨核细胞。应用基因芯片 技术检测巨核细胞、非巨核细胞和meg-Ol细胞株的基因差异表达。选择THBSl、HOXA9、13-actin、 IL-8、ANXA6、FGF-8对检测结果进行RT．PCR验证。结果巨核细胞样本与非巨核细胞样本比较，呈 显著差异表达的基因有116个，其中52个上调，64个下调；巨核细胞样本与meg旬l细胞株样本比较 呈显著差异表达的基因有158个，其中71个上调，87个下调。THBSI在巨核细胞表达高于非巨核细 胞，HOX A9在巨核细胞表达低于非巨核细胞；B—actin在巨核细胞与非巨核细胞的表达无差别。IL-8 在巨核细胞表达高于meg旬l细胞株；ANXA6在巨核细胞表达低于megOl细胞株；FGF-8在巨核细胞 与meg-01细胞株的表达无差别。结论巨核细胞、非巨核细胞和meg．0l细胞株基因表达存在显著 差异。差异表达中的调控基因包括应激反应基因、免疫相关基因、DNA合成和修复基因、新陈代谢基 因、肿瘤基因和肿瘤抑制基因等。 【关键词】 巨核细胞；基因表达； 寡核苷酸序列分析；体外研究 blood of of fromhumancord v／tro AnMysisgeneexpressionprofilesmegakaryocytes CD二cells／n DNA HE ji。WANG Fei，CHENShu．uU expandedusing microarray F8ng，ZHUFa—ming，Qm Center Blood fin-hui，LuHang-jun，YANLi—xing．BloodofZhejiangProvince，KeyLaboratoryof Safety 310006，China Research，MinistryofHealth，Hangzhou amhor：YAN CorrespondingLi—xing，Email：ylx@驰org．err To the of human 【Abstract】Objective studygeneexpressionprofilesmegakaryocytes(MKs)from COrd cellsinvitro and bloodCD0 tounderstand atthemolecularlevel．Methods expanded megakaryopoiesis wereisolated and activatedcell cells CD五cells using gradient magnetic density centrifugation sorting．r111e wereculturedandstimulatedwithrecombinanthuman 12 MKsfraction