内皮素-1在肺癌中的表达及其与血管生成的关系【荐】.docVIP

内皮素-1在肺癌中的表达及其与血管生成的关系 　　作者：刘甡 江晶 王春玲 作者单位：佳木斯大学第一附属医院呼吸内科，黑龙江 佳木斯 154002 　　【摘要】 目的 了解内皮素-1(ET-1)在肺癌组织标本中的表达并定量分析其与肺癌分型、分级的关系，观察ET-1的表达与肿瘤微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系，探讨ET-1在肿瘤血管生成中的作用。方法 用免疫组织化学SABC染色方法检测ET-1及VEGF在肺癌中的表达、MVD的计数，并用图像分析技术测定ET-1的含量。结果 ET-1主要分布在肿瘤细胞的胞浆中，在鳞癌、腺癌等非小细胞肺癌中高表达，而在小细胞肺癌中的阳性表达率低。图像分析表明，鳞癌、腺癌的分化程度越低ET-1含量越高，分化程度越高ET-1含量越低。ET-1表达阳性组中MVD显著增高，且ET-1的表达与VEGF有关。结论 ET-1存在于肺癌细胞中，在腺癌和鳞癌组织中高表达，且ET-1含量与肿瘤分化程度有一定关系。ET-1可能作为一种血管生成促进因子参与肺癌的血管形成。 　　【关键词】 肺癌;内皮素;血管形成;免疫组化 　　内皮素-1(ET-1)在肿瘤血管形成过程中的作用日益引起广泛的重视。ET-1可通过旁分泌的方式直接及间接的促进肿瘤中血管的生成。有研究证实ET-1在肺癌组织中高表达并参与诱导肺癌细胞的增殖〔1〕。本实验采用免疫组织化学SABC方法及图象分析技术，检测肺癌组织中ET-1的阳性表达及其与微血管密度的关系，以探讨ET-1与肺癌的生长和转移的关系，为临床应用提供理论依据。 　　1 资料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 研究对象 所有对象均来自2004年1月～2006年12月我院经手术或纤支镜检查获得的肺组织石蜡标本。分3组:(1)肺癌组:共40例，年龄28～72(平均52.6)岁;男21例，女19例。所有患者术前均未接受化疗、放疗及其他抗癌治疗，所有标本均重新切片后经HE染色证实为肺癌。组织学分类参照WHO (1981年)标准，其中鳞癌21例，腺癌14例，小细胞未分化癌5例;高分化20例，中分化7例，低分化8例;非小细胞肺癌依照1997年国际抗癌联盟〔MCC〕修订的标准进行临床分期，其中Ⅰ期+Ⅱ期21例，Ⅲ期+Ⅳ期14例。(2)肺良性病组:共12例，男9例，女3例;年龄28～70(平均49.8)岁。标本重新切片后经HE染色证实7例为结核球、5例为肺炎。(3)正常对照组:共10例，男6例，女4例;年龄34～68(平均47.6)岁。10例正常对照组标本来源于行肺叶切除术的肺组织中远离病变的正常肺组织，经HE染色证实为正常肺组织。 　　1.1.2 试剂与药品 主要购自武汉博士德生物工程有限公司：(1)兔抗人内皮素多克隆抗体(即用型);(2)兔抗人血管内皮生长因子多克隆抗体〔即用型〕;(3)兔抗人第8因子相关抗原多克隆抗体〔即用型〕;(4) HIGH-SABC试剂盒:正常山羊血清封闭液、生物素标记的二抗山羊抗兔IgG、HIGH-SABC〔链酶亲和素-过氧化物酶复合物〕、复合消化液及抗原修复液。 　　1.2 方法 采用SABC免疫组织化学染色法。所有石蜡标本均行5 Μm切片，连续切4片，置60℃烤箱内烤30 min。所有切片分别经二甲苯脱蜡，无水乙醇及其他不同浓度乙醇脱苯，自来水洗2 min水化。一张切片行HE染色核实病理诊断，其余切片行SABC染色，按药盒操作规程进行。以PBS代替一抗作阴性对照，用武汉博士德生物工程有限公司提供的已知阳性切片作阳性对照。 　　1.3 结果判定 　　1.3.1 ET-1、血管内皮生长因子(VEGF)表达的判定标准 采用SABC免疫组化染色法，镜下观察细胞浆呈棕黄色颗粒状，切片中观察5个高倍视野(200×)，每一视野记数100个细胞，阳性染色细胞5%为阴性，≥ 5%为阳性。 　　1.3.2 肿瘤微血管密度(MVD)的测定 参考Weidner方法先在低倍镜(40×)下扫视整个切片，确定对FⅧRAg明显着色(棕褐色)微血管密度最高区，即所谓热点区。然后换成高倍镜(200×)进行记数。凡在肿瘤组织中与邻近微血管、肿瘤细胞及其他结缔组织分界清楚的任何一个染成棕褐色的细胞或细胞簇均被认为是一个血管;只要结构不相连，其分枝结构也算作一个血管。但不能用有无红细胞的出现及是否形成管腔来记数血管数。已形成明显肌层的血管不参与计数，结果以3个视野血管的均数表示。 　　1.4 统计学处理 计量资料数据采用x±s表示，所得数据采用t检验和方差分析;计数资料采用Χ2检验。 　　2 结果 　　2.1 不同肺组织中MVD、VEGF和ET-1表达分布情况 MVD阳性染色局限