应用TaqMan+MGB探针实时荧光定量PCR结合分离培养监测分析灰仓鼠细菌多样性.pdfVIP

应用TaqManMGB探针实时荧光定量PCR结合分离培养监 测分析灰仓鼠细菌多样性 高正琴 邢进 冯育芳 关伟鸿 贺争鸣 岳秉飞 中国食品药品检定研究院，北京100050 [摘要]目的：近年来，灰仓鼠已被用作鼠疫、包虫病、利氏曼病、肿瘤研究的理想的动物模型。中国现在正在进行灰 仓鼠实验动物化。实验的重现性要求灰仓鼠不能携带一些已知的病原体。由于缺乏早期研究数据，特别是几乎没有灰 仓鼠细菌多样性信息，至今中国尚无灰仓鼠质量控制标准。本研究的主要目的是监测分析中国灰仓鼠细菌的多样性，收 集更多的质量信息，获得更全面的微生物背景知识，为灰仓鼠的种群建立、生物净化和动物模型的建立提供科学的数据 依据。方法：60只成年灰仓鼠来自新疆地区，安乐死后剖解采集标本。应用TaqManMGB探针实时荧光定量PCR和常 规微生物学方法进行细菌多样性研究。结果：本研究采用常规微生学方法从灰仓鼠中鉴定出166株细菌，包括70株革 兰氏阴性细菌：大肠埃希菌(22株)、鲍氏志贺菌(2)、肺炎克雷伯菌(6)、阴沟肠杆菌(5)、栖冷克吕沃尔菌(1)、嗜肺巴斯 德菌(2)、溶血性巴斯德菌(3)、产气巴斯德菌(9)、铜绿假单胞菌(6)、栖稻假单胞菌(1)、门多萨假单胞菌(4)、粪产碱杆 菌(1)、阴道加特纳菌(1)、卡它莫拉菌(2)、莫拉克斯氏菌(1)、CDCgroupEF-4a(2)以及96株革兰氏阳性细菌：特氏纤 维单胞菌(5)、戊糖片球菌(6)、金黄色葡萄球菌(1)、溶血性葡萄球菌(2)、腐生葡萄球菌(2)、模仿葡萄球菌(1)、头状葡 萄球菌(4)、孔氏葡萄球菌(6)、木糖葡萄球菌(2)、鸡葡萄球菌(4)、里昂葡萄球菌(1)、山羊葡萄球菌(1)、粘滑罗斯菌 (9)、麻疹孪生球菌(2)、肺炎链球菌(1)、咽峡炎链球菌(1)、血链球菌(2)、牛链球菌 Ⅰ型(2)、乳房链球菌(1)、少酸链 球菌(1)、无乳链球菌(1)、粪肠球菌(4)、黄肠球菌(10)、浅绿气球菌(4)、解酪蛋白巨大球菌(2)、拥挤棒杆菌(1)、人皮 肤棒状杆菌(1)、蜂房芽孢杆菌(1)、短芽孢杆菌(2)、环状芽胞杆菌(4)。分离培养鉴定出12个科21个属48个种166 株细菌，肠杆菌科是主要优势菌群，葡萄球菌科、肠球菌科、假单胞菌科、巴斯德菌科、链球菌科是次优势菌群。应用Taq- ManMGB探针实时荧光定量PCR方法从灰仓鼠中检出167份核酸阳性标本，包括：支原体(41)、泰泽氏菌(34)、空肠弯 曲菌(27)、CAR菌(27)、幽门螺杆菌(26)、肝螺杆菌(10)、嗜肺巴斯德菌(2)。TaqManMGB探针实时荧光定量PCR检 测结果显示支原体是最主要的优势菌群，泰泽氏菌、空肠弯曲菌、CAR菌、幽门螺杆菌、肝螺杆菌是次优势菌群。结论： TaqManMGB探针实时荧光定量PCR结合分离培养能够更有效的监测分析灰仓鼠细菌多样性，获得更多更全面的微生 物多样性信息，该信息对灰仓鼠质量控制标准的制定具有重要意义。研究结果为我国灰仓鼠微生物学监测以及质量标 准的制定提供了科学依据。 [关键词]：灰仓鼠;细菌多样性;TaqManMGB探针;实时荧光定量PCR;常规微生学方法;分离培养;生化鉴定;监 测分析 MonitorandanalysisbacterialdiversityofCricetulusmigratoriusbyTaqManMGB probereal-timefluorescencequantitativePCRandbacteriaisolationculture GAOZheng-qinXINGJinFENGYu-fangGUANWei-hongHEZheng-mingYUEBing-fei NationalInstitutesforFoodandDrugControl,Beijing100050,China Abstract:ObjectiveTheCricetulusmigratorius(grayhamster)hadbeenusedasanidealanimalmodelforthe researchofplague,echinococcosis,leishmaniases,tumorinrecentyears.ExperimentalanimalizationoftheCricetu lusmigratoriusisbeingcarriedoutinChinanow.Cricetulusmigratoriu