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水疱性口炎病毒RT_LAMP快速检测方法的研究.pdf
·24 · AnimalHusbandry＆VeterinaryMedicine 2009 Vo.l41 No.7
水疱性口炎病毒 RT-LAMP快速检测方法的研究
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罗 琼 , 田纯见, 林志雄 , 陈 茹, 朱道中, 黄青云
(1.广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心, 广东广州 5 10623;
2.华南农业大学兽医学院, 广东 广州 5 10642)
:根据逆转录环介导 温扩增 (RT-LAMP)原理, 针对水疱性口炎病毒 (VSV)糖蛋白 G基因序列中的 6 个区域设计内外各 1对特异引物,
建立扩增 VSV糖蛋白 (G)基因的 RT-LAMP方法。扩增产物电泳呈特异的阶梯状条带分布, 扩增产物加 SYBRGREENI染色呈特征性的黄绿色,
肉眼可直接观察判定。 同时, 还建立了可以进行定量检测的实时 RT-LAMP方法。特异性试验显示, 本方法可快速检验鉴别 VSV与口蹄疫病毒
(FMDV)和猪水泡病病毒 (SVDV)。敏感性试验显示, 建立的实时 RT-LAMP方法检测 VSVRNA的最低检测量为 0.0 1 PFU, 比实时荧光 RT-PCR
显著提高。建立的 LAMP方法可检测 p-VSV质粒 DNA的最低量为 6.36×10 3 pg/μL(1.4×103 copies/μL), 比 PCR也显著提高。综合表明, 本
NJ
研究建立 RT-LAMP检测 VSV的方法具有特异、 敏感、 快速、 简便的特点, 具有开发应用前景。
:水疱性口炎病毒;糖蛋白基因;克隆;逆转录环介导 温扩增 (RT-LAMP)
:S852.6 :A :0529-5130 (2009 )07 -0024-05
Rapiddetectionofvesicularstomatitisvirusbyreversetranscription
loop-mediatedisothermalamplification(RT-LAMP)
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LUOQiong, TIANChun-jian, LINZhi-xiong, CHENRu,
1 2
ZHUDao-zhong, HUANGQing-yun
(1.InspectionandQuarantineTechnologyCente,rGuangdongEntry-ExitInspectionand
QuarantineofBureau, Guangzhou510623, Chin;a
2.CollegeofVeterinaryMedicin,eSouthChinaAgriculturalUniversity, Guangzhou510642, China)
Abstrac:tArapid, one-step, reversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplification(RT-LAMP)assaywasdevelopedinthisstudy
toenablevesicularstomatitisvirus(VSV)tobedetectedinanhourinasingletuberwithoutthermalcycle.Theamplifiedproductappeared
aladder-likepa
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