亚麻酸的色谱检测方法.docVIP

保健食品中α-亚麻酸、γ-亚麻酸的测定 发布时间：2006-8-18??作者：??来源：中国保健食品产业网??点击：385?? 1. 范围 ??? 本方法规定了保健食品中α-及γ-亚麻酸的测定方法。 本方法适用于油脂保健食品中α-及γ-亚麻酸含量的测定。 本标准还适用于油脂保健食品中C16～C22不饱和脂肪酸和角鲨烯含量的测定。 本方法最低检出量：γ-亚麻酸为0.050μg、α-亚麻酸为0.030μg。 本方法最佳线性范围：0～0.50mg/mL 2.原理 ??? 将油脂试样（或试样提取的脂肪），经氢氧化钾皂化，在三氟化硼存在下甲醇酯化，然后用气相色谱仪分析，采用外标法定量。 3. 试剂??? 所用试剂除注明外均为分析纯 3.1 正己烷：沸点68.7。 3.2 氢氧化钾甲醇溶液：C(KOH)为0.5mol/L。称取28g KOH容于1000mL纯水。 3.3 三氟化硼甲醇溶液（1＋4）：取40%三氟化硼乙醚溶液1份，加甲醇4份，混匀即可。 3.4 α-亚麻酸甲酯 99.0% 3.5 γ-亚麻酸甲酯 99.0% 3.6 标准储备液 ?称0.0250g的α-亚麻酸甲酯及0.0250mg的γ-亚麻酸甲酯标准品，分别用正己烷溶解，并定容于25mL容量瓶中，混均，浓度分别为1.0mg/mL。 3.7 标准使用液? 分别取α-亚麻酸甲酯及γ-亚麻酸甲酯标准储备液各5.0mL置于10mL的容量瓶中，混均，α-亚麻酸甲酯和γ-亚麻酸甲酯的含量为0.5mg/mL。 4. 仪器与设备 4.1 气相色谱仪，附氢火焰（FID）检测器。 4.2 数据处理机，或积分仪。 4.3 分析天平：1/10000。 4.4 分析天平：1/1000。 4.5 加热式磁力搅拌器。 4.6 标准磨口烧瓶(50mL)和直形冷凝管。 5. 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 脂肪的提取? 按GB/T 5009.6中规定的方法提取。 5.1.2 皂化 称取0.100g油脂（或脂肪）和磁力搅拌子一并放入50mL磨口烧瓶中（见图1），加入4mL0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液，上部连接回流冷凝管，并固定于磁力搅拌器上，由冷凝管上口向溶液中导入氮气；使反应瓶中始终充满氮气。开启磁力搅拌器，并加热使反应液保持65±5，搅拌回流约15min。 5.1.3 甲脂化 从冷凝管上部加入4mL三氟化硼甲醇溶液，搅拌(65±5)，回流约2min，冷至室温，从冷凝管上部加入5mL正己烷继续搅拌5min，移去冷凝管，加入5mL饱和氯化钠水溶液，摇动数分钟，转移至25mL分液漏斗中分离水与有机相，再加3mL正己烷洗水相，分离，弃水相，合并有机相并定容至10mL(浓度低时吹氮浓缩至1.0mL)。供测定用。 5.2 ?气相色谱参考条件 5.2.1 色谱柱：FFAP（改性聚乙二醇20M，30m×0.25mm i.d. 0.25μm）。 5.2.2 柱箱温度：215。 5.2.3 进样口温度：250 。 5.2.4 检测器温度：260。 5.2.5 氮气：50mL/min，301分流；氢气：45mL/min；空气：500mL/min。 5.3 定性分析 ??? 在上述仪器条件下，分析取标准使用液和试样测定液1.0μL，注入气相色谱仪，以保留时间来确定α-及γ-亚麻酸甲酯。 5.4? 定量分析 试样中α或γ-亚麻酸甲酯色谱峰面积或峰高与标准的比较定量。 5.????? ?分析结果 试样中α或γ-亚麻酸测定结果按（1）式计算 6.1 计算 式中： χ――α或γ-亚麻酸含量，%； A1――试样中α或γ-亚麻酸甲酯色谱峰面积或峰高； A2――标准使用液色谱峰面积或峰高； ρ ――标准使用液浓度, mg/mL； ν――正己烷定容体积, mL； m――试样质量, g； 0.????? 952――亚麻酸换算系数。 ??? 脂肪试样再换算原保健食品试样中γ-亚麻酸和α-亚麻酸的量。 6.2 结果表述 ?? 计算结果保留三位有效数字。 7. 技术参数 相对标准偏差：10%.。 回收率：93.0%～101.7% ?? 8. 色谱参考图?? 气相色谱参考条件??? 色谱柱：FFAP（改性聚乙二醇20M，30m×0.25mm i.d. 0.25μm）。 柱箱温度：215。进样口温度：250 。检测器温度：260。 氮气：50mL/min，301分流；氢气：45mL/min；空气：500mL/min。