ACCC-微生物菌种常规保藏技术规程.docVIP

国家自然科技资源平台 微生物菌种常规保藏技术规程（试行） 《自然科技资源收集、整理、保存技术规程研究与制定》 项目组 二〇〇四年十二月十日 目 次 前 言………………………………………………………………………………………2 引 言………………………………………………………………………………………3 1范围…………………………………………………………………………………………4 2定义…………………………………………………………………………………………4 3基本原则……………………………………………………………………………………5 4方法…………………………………………………………………………………………5 附　录　A 定期移植保藏法…………………………………………………………………6 附　录　B 液体石蜡保藏法…………………………………………………………………9 附　录　C 沙土管保藏法…………………………………………………………………11 参考文献……………………………………………………………………………………13 前 言 本规范由国家自然科技资源平台建设项目提出。 本规范起草单位：中国农业科学院土壤肥料研究所、中国食品发酵工业研究院、中国兽医药品监察所、中国科学院微生物研究所、中国林业科学研究院森林保护研究所、中国药品生物制品检定所、中国医学科学院医药生物技术研究所。 本规范主要起草人：程池、李金霞、胡海蓉、姜瑞波、顾金刚、周宇光、朴春根、叶强、张月琴、陈敏等。 引 言 微生物菌种常规保藏是一类重要的基本操作技术，广泛应用于科学研究、教学及生物技术产业，是保护微生物菌种资源的重要手段，是科研教学及生物技术产业正常运转的重要保障。本规程包括定期移植保藏法、液体石蜡保藏法和沙土管保藏法三种常用微生物菌种保藏方法。 制定本规程是为了规范微生物菌种常规保藏技术操作，加强管理，以达到保护微生物菌种资源，利用微生物菌种资源及实现资源共享的目的。 微生物菌种常规保藏技术规程 1范围 本规程规定了微生物菌种常规保藏技术的基本原则和方法。 本规程适用于微生物菌种的常规保藏工作。 2定义 本规程采用下列定义。 2.1 微生物菌种资源 microorganism resources 指可培养的有一定科学意义、具有实际或潜在实用价值的古菌、细菌、真菌、病毒、细胞株等及其相关信息数据。 2.2 菌种保藏 culture preservation 是指将微生物菌种用各种适宜的方法妥善保藏，避免死亡、污染，保持其原有性状基本稳定。 2.3 定期移植保藏法 subculturing 亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于4℃－6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。 2.4 液体石蜡保藏法 preservation under liquid paraffin 亦称矿物油保藏法,定期移植保藏法的辅助方法。是指将菌种接种在适宜的斜面培养基上，最适条件下培养至菌种长出健壮菌落后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于4℃－15℃进行保存的一种菌种保藏方法。 2.5 沙土管保藏法 sand preservation 亦称载体保藏法。是指将培养好的微生物细胞或孢子用无菌水制成悬浮液,注入灭菌的沙土管中混合均匀，或直接将成熟孢子刮下接种于灭菌的沙土管中，使微生物细胞或孢子吸附在载体上，将管中水分抽干后熔封管口或置干燥器中于4℃－15℃进行保存的一种菌种保藏方法。 3基本原则 3.1 应针对菌种特性选择适宜方法进行保藏。 3.3 应保证菌种保藏的安全性，不能对周围环境造成污染和危害。 4方法 4.1 定期移植保藏法 见附录A。 4.2 液体石蜡保藏法 见附录B。 4.3 沙土管保藏法 见附录C。  定期移植保藏法 适用范围 本方法适用于大多数细菌和真菌。 原理 低温条件下保藏可减缓微生物菌种的代谢活动，抑制其繁殖速度，达到减少菌株突变，延长菌种保藏时间的目的。 保藏培养基一般含较多有机氮，糖分总量不超过2%，既能满足菌种培养时生长繁殖的需要，又可防止因产酸过多而影响菌株的保藏。 技术要求 不同菌种应根据要求选择合适的培养基。 接种时要求无菌操作，避免染菌。 保藏期间要定期检查菌种存放的房间、冷库、冰箱等的温度、湿度，各试管的棉塞有无污染现象，如发现异常应取出该管，重新移植培养后补上空缺。 大量菌种同时移植时，各菌株的菌号、所用培养基要进行核对，避免发生错误。 每次移植培养后，应与原保藏菌株和菌株的登记卡片逐个对照，检查无误后再存放。 斜面菌种应保藏相继三代培养物以便对照，防止因意外和污染造成损失。 方法与