抗体芯片在胰腺癌比较蛋白质组学研究应用.pdfVIP

148【l第七届全国胰腺癌研究进展暨规范化诊治学术研讨会论文汇编2010．猡威劳 抗体芯片在胰腺癌比较蛋白质组学研究中的应用 倪晓光孟强王贵齐 白晓枫刘芳赵平 【摘要】目的运用抗体芯片筛选胰腺癌与癌旁正常胰腺组织之间差异表达的蛋白质，以期发 现有价值的新的胰腺癌肿瘤标志物。方法应用含有378种已知蛋白质的单克隆抗体芯片比较7例 胰腺导管腺癌混合样品及其配对癌旁正常胰腺组织混合样品的差异表达蛋白谱。结果发现20种 b 在胰腺癌中明显差异表达的蛋白质，其中高表达的蛋白质11种(UbcH6、GABA R2、Plakophilin 3、STAT 2a、Inhibitor2、Nestin、SheC、PRK2、Neurogenin3、NHE·3和SRP54)，低表达蛋白质 9种(DCC、HPV·16 论抗体芯片是比较蛋白质组学研究的一种有效手段，这些异常表达的蛋白质有助于认识胰腺癌的 发病机制，有助于寻找胰腺癌新的诊断标志物和治疗的靶标。 【关键词】胰腺肿瘤；蛋白质组；芯片分析技术 胰腺癌恶性程度高，发病隐匿，预后差，目 诊断均为胰腺导管腺癌。 前缺乏有效的早期诊断标志物。分离和筛选胰腺 二、抗体芯片杂交 癌相关的标志蛋白，尤其是一些分泌型的肿瘤相 本实验选用BDClontechTM380抗体芯片 关蛋白或相关肽，对胰腺癌的早期诊断十分重要 (BDBiosciencesClontech公司)，按照试剂盒说明 n】。蛋白质抗体芯片是比较蛋白质组学研究的重 书进行操作。7例胰腺导管腺癌标本各称取200 要技术手段之一。本研究选用世界上第一个商品 mg，使用液氮在研钵中研磨成粉末充分混合，制 化的排列了针对378种已知蛋白质的单克隆抗体 成混合癌组织样品，同样方法制成混合癌旁组织 芯片筛选胰腺癌与正常胰腺组织间差异表达的蛋 样品。在样品中加入提耵标记缓冲液制成匀浆，4 白质，平行、高通量地同时比较涉及细胞信号转 rain，取上清，使用MicroBCA ℃，100009离心30 导、细胞周期调控、细胞骨架结构、细胞凋亡以 Ⅲ蛋白定量试剂盒(Pierce 及肿瘤发生等几百种细胞中重要的功能蛋白质的 测蛋白浓度，将两个样品的蛋白浓度都稀释到1．1 表达水平。 Biotech公司)分别标记等量的癌和癌旁样本(各 材料和方法 450 Ixl)，产生4个标记样品，即cy5一癌、Cy3 一癌、Cy5一癌旁和cy3一癌旁。然后经过PD．10 一、标本来源和临床资料 Bioteeh公司)洗脱，除去样品 脱盐柱(Amersham 选择2001年11月至2002年10月我院手术中未结合的荧光染料，运用上述蛋白定量方法检 的7例胰腺癌患者，其中男性4例，女性3例， 测流出液的蛋白浓度。取Cy5一癌和Cy3．癌旁 年龄44～75岁，中位年龄6l岁。所有患者术前各40峭混合后与试剂盒中的一张芯片(Slidel)杂 都未经放疗及化疗。手术切下标本后10rain内取 交，取Cy5一癌旁和cy3一癌各40pg混合后与 材，取材时避免明显的坏死区域，同时在离肿瘤 2)杂交。在室温下轻 同试剂盒的另一张芯片(Slide 至少1．5cm处切取对应的远端癌旁正常胰腺组 微震荡30min，用洗液清洗芯片后，将芯片放在