血红蛋白的提取与分离(上课).pptVIP

(2)、样品处理 1、红细胞的洗涤： 目的是去除杂蛋白。要加入柠檬酸钠防止血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出黄色血浆；用生理盐水洗涤。 2、血红蛋白的释放： 在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放 3、分离血红蛋白溶液： 离心分层；滤纸过滤去除脂溶性沉淀层；分液漏斗分出红色透明液体。 4、透析： 装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（PH为7.0）透析。 分离血红蛋白溶液 * * 专题5 DNA和蛋白质技术 (一）回忆蛋白质 占细胞干重的50％以上，细胞中含量最多的有机物 2、组成元素 C、H、O、N，有的含有P、S还有的含Fe、Mn、Zn、I等 1、含量 3、相对分子质量: 高分子化合物 一、基础知识 4、基本组成单位: 氨基酸 脱水缩合 5、氨基酸通式 R H C COOH NH2 6、氨基酸连接方式 7、肽键 CO NH 8、蛋白质形成过程 氨基酸 肽链 蛋白质 脱水缩合 盘曲折叠 （一条或者多条） 氨基酸的种类不同；数目成百上千；排列顺序变化多端；多肽链的空间结构千差万别 9、蛋白质结构的多样性原因： 构成细胞和生物体结构的重要物质 催化 运输 调节 免疫 10、颜色反应： 蛋白质+双缩脲试剂 紫色 10、蛋白质的功能 血红蛋白含有四条肽链,每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。 分离蛋白质的依据： 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质 一 凝胶色谱法 ②实例：葡聚糖、琼脂糖 3、凝胶 1、别名：分配色谱法 ①特点：一些微小多孔的球体，内含许多贯穿的通道 2、分离蛋白质的依据： 蛋白质相对分子质量的大小 4、凝胶色谱法的原理 原理： 当不同的蛋白质通过凝胶时 相对分子质量较小 相对分子质量较大 凝胶内部的通道 容易进入 无法进入凝胶内部的通道 只能在凝胶外部移动 路程较长 移动速度较慢 路程较短 移动速度较快 相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 二、缓冲溶液 1、概念 具有缓冲作用的溶液叫做缓冲溶液 能够抵制外界的酸或碱对溶液的PH值 的影响，维持PH基本不变 2、作用 3、缓冲溶液的配制 通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液 4、常见的缓冲溶液成分 H2CO3 NaHCO3 NaH2PO4 Na2HPO4 思考：在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？ 使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能 三、实验操作 样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定 1、样品处理 （一）蛋白质提取和分离步骤 (1)血液组成 （二）操作过程 红细胞（最多） 血红蛋白 （90％） * * *