牛肺泡巨噬细胞微小RNA的克隆和鉴定.pdfVIP

全国兽医病理学、动物病理生理学学术会议论文集 牛肺泡巨噬细胞微小RNA的克隆与鉴定 of fromBovineAlveolar andIdentificationmicroRNA Cloning Macrophage 徐广贤，张艳，李娟，贾浩，王玉炯+ (宁夏大学生命科学学院，宁夏银川市西夏区贺兰山西路750021) 严格的时间和组织特异性，其异常表达将会导致生理的异常和疾病的产生。为了研究miRNAs在牛肺泡巨噬细胞抗 菌机制中的作用，我们构建了牛肺泡巨噬细胞miRNAeDNA文库，共从438个克隆中，筛选出22个miRNAs，其中 此，我们将它们命名为： 数据为研究miRNAs调控牛肺泡巨噬细胞抗菌机制奠定了基础。 关键词：MicroRNA，牛肺泡巨噬细胞，克隆，鉴定 MicroRNA(miRNA)是一类长约22个核期发现在牛肺泡巨噬细胞特异性表达的miRNA 苷酸的内源性非编码单链小分子RNA，可调节 分子，研究miRNA分子对牛肺泡巨噬细胞抗菌 与其序列互牢bmRNA的表达，普遍存在于高等生活性的调节机制。 物界，在不同物种间具有高度的保守性，其表达 1材料与方法 具有高度组织特异性、保守性和时序性，能通过 与靶基因mRNA特异性的碱基配对导致其降解1．1 主要试剂和仪器 或翻译阻遏，从而参与个体发育、细胞分化、细 RNA—Solv Bio—Tek，Lilbum， reagent(Omega 胞增殖、物种进化以及疾病发生过程中的基因表 DNA GA)，20 Ladder(TaKaRaCode：D521)， bp 达调控【l巧】。miRNA表达具有严格的时间和组织 14—30ssRNALadder Code： Marker(TaKaRa 特异性，其异常表达将会导致生理的异常和疾病 RNAGelExtraction D3416)，Small Kit(TaKaRa 的产生[6,71。 Code：D9 RNA Kit(TaKaRa 106)，SmallCloning 牛肺泡巨噬细胞是胞内寄生菌(如牛结核 Code：DRR065)，T 4DNA连接酶，TaqDNA聚 分枝杆菌、副结核分枝杆菌等)的主要靶细胞， 在胞内寄生菌的发生、发展过程中起着重要的作 凝胶回收试剂盒(EZ一10ColunmDNAGel Spin 用，肺泡巨噬细胞的增殖与凋亡对于胞内寄生菌 Extraction Kit)，质粒快速提取试剂盒(Plasmid’ 的侵袭与在细胞内存活起着决定性的作用阻13】， IsolationKit，BioDev)购自博大泰克公司； Rapid 有关miRNAs在牛肺泡巨噬细胞抗菌机制中的作