柱切换高效液相色谱法测定人血浆中布洛芬对映体浓度方法的研究.pdfVIP

2008 第十一次全国临床药理学学术大会 Th．11th ◎ NationalCongressofCttnicalPham∞o‘o甜 柱切换高效液相色谱法测定人血浆中 布洛芬对映体浓度方法研究 梁茂植余勤 向瑾秦永平 南峰 四川大学华西医院临床药理研究室成都，610041 一、引言 当药物分子结构中与碳原子相连接的4个原子 fen，S—IBU)对照品(中美天津史克制药有限公司)， 或基团互不相同时，该药物称为手性药物。建立快 速、准确、灵敏的对映体拆分方法为评价手性药物各 为：SKF 对映体的生物活性提供了关键的技术手段。在生物 (四川大学华西药学院)。实验中所用试剂试药除 样品中，手性药物及其代谢物的含量极微，且易受到 正己烷、异丙醇、三氟乙酸和甲醇为色谱纯外，其余 大量内源性成分的干扰，分离测定难度较大¨．z一。 均为分析纯。 2．储备液配制 布洛芬(Ibuprofen，IBU)是一类应用广泛的非 甾体解热镇痛药，其左右旋体在体内的药理活性、代 精密称取布洛芬对照品10mg、(S)一(+)一布洛 谢过程存在显著的差异旧剖，体外实验表明其右旋 芬对照品5mg，各置于10mL棕色容量瓶中，用甲 体的药理作用是左旋体的160倍，但在体内仅为1． 醇溶解并定容至刻度，即得布洛芬储备液(1000 ms／L)，储 4倍，主要原因是在体内无活性的R-(-)一布洛芬转ms／L)和(S)一(+)-布洛芬储备液(500 化为活性的S一(+)-布洛芬，因此布洛芬对映体的存于一30℃冰箱备用。临用时分别用色谱纯甲醇分 拆分测定十分必要。目前测定布洛芬对映体血药浓 别稀释为标准系列工作液。 度的方法主要有：高效液相色谱法(HPLC)一4引，毛 精密称取对溴苯甲酸5mg，用甲醇溶解并定容 于25mL容量瓶，即得内标储备液(200 细管电泳法(CE)¨刮等；此外高灵敏度高选择性的 mg·L“)， 高效液相色谱一质谱(HPLC—MS／MS)Ⅲ1、气相色谱一储存于一30℃冰箱备用。临用时用色谱纯甲醇稀释 成内标工作液(5．0mg／L)。 质谱(GC—MS／MS)¨副联用技术也应用于布洛芬对 映体血药浓度的测定；其中以手性固定相高效液相 3．色谱条件 色谱法(CSP)最为常用，常用的手性固定相为AGP手性柱为ChiralcelOJ—H柱(DaicelChemicals， 250mmx4．6 柱‘乳11]、AD柱¨2’131等。oJ．H手性柱是纤维素类手 nllnx4．6 性柱，适宜于分离甲基芳基酯和甲氧基芳基酯化合 SiO柱(50 nlln，5斗m)；手性柱前接一氰 millX3 物¨8|，目前尚未见使用该手性柱分离测定人血浆中 基预柱(Phenomenex，4mm)。流动相为正 布洛芬对映体的相关报道。本文建立了柱切换 己烷／异丙影三氟醋酸(96．5／3．5／0．1，v／v／v