基于两栖动物评价TH-TR信号通路干扰作用方法学研究.pdfVIP

第六届全国环境化学大会 环境监测及毒理 基于两栖动物评价TH—TR信号通路干扰作用的方法学研究 张银凤，秦占芬 (中国科学院生态环境研究中心北京100085) 甲状腺激素对脊椎动物的生长发育有 用该方法检测可能具有甲状腺干扰作 重要作用，尤其是神经发育和骨骼生长，研 用的物质如BPA。挑选黑斑蛙Gosner27阶 究显示有些污染物可能具有甲状腺激素干 段蝌蚪48只，随机放入16个8L水的缸中， 1umol／L、 扰作用，如PcB和PBDE。因此有必要建立每缸6只，设DMSO对照、BPA0 J。 BPAlumol／L、BPA 3 检测污染物的甲状腺干扰作用的方法【l 10umol／L、以及BPA TH的合成、分泌、运输以及甲状腺激 个浓度与T31nmol／L的复合暴露，共八组； 素受体(TR)的作用等各个途径受到干扰，每组两个平行。暴露48h后提取其脑、肠和 都会产生甲状腺干扰作用。其中T3与靶组 尾的RNA，做RT-PCR检测基因表达的变 织核中的TR结合，调控相关基因的表达， 化。暴露期间停止喂食，每天换水。 进而产生相应的生物学效应的过程称为 结果显示：BPA单独暴露无明显的作 TH—TR信号通路，我们所关注的就是通过用，而10umol／L与T3的复合暴露，有明显 TH—TR信号通路产生的甲状腺干扰作用，而的抑制肠中TRb表达的作用，如图2所示。 且TH—TR信号通路在进化生物学上高度保 守，可以从两栖动物类推到人类【2J。 外源性TH可以诱导两栖动物提前变态 为研究甲状腺干扰作用提供了一个独特的 生物模型，蝌蚪变态期前，体内只有TR表 达，没有TH，在外源性的TH作用下，可 1nmol／L 图1黑斑蛙27／28阶段暴露T3 以调控TR基因表达升高。因此可以通过检 测TR基因和蛋白的变化，来推测环境污染 ! ：：| 上 T口T3(1nm) 物是否具有甲状腺激素干扰作用。 蠹l 本研究通过对两栖动物蝌蚪T，的短期 引 ∥_L|，傩 。 暴露实验，检测不同发育阶段、不同器官中 l ㈨tr0L㈣。I…L／LmI…L／LmI。…L／L TR表达的变化，建立一种敏感的检测甲状 图2黑斑蛙27阶段暴露BPA 腺干扰作用的方法。 基金项目：环保公益性行业科研专项(No 挑选黑斑蛙Gosner27／28阶段蝌蚪68 201109048)，国家自然科学基金(No 只，随机放入15L水的缸中，设对照和T3 1nom／L，每组两个平行。暴露3天，各缸每 参考文献 隔24小时提取5只蝌蚪的脑、肠和尾RNA， al of action2006 OP,et [1]RobertAnalysis 1