MiR-21，miR-126，miR-143，miR-373在正常宫颈组织、宫颈癌组织和Hela细胞中的表达差异.pdfVIP

MiR一21，miR一1 宫颈组织、宫颈癌组织及Hela细胞中的表达差异 刘琳王月玲王江芬 西安交通大学第一附属医院妇产科，西安，710061 子宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，其发生与多种肿瘤抑癌基因的失活及癌基因 而使靶mRNA降解或在转录后水平抑制翻译，进而调控基因表达，参与多种重要的生理和病理过程。 近年来的研究发现micwRNA与多种肿瘤的发生发展相关，但在宫颈癌中的研究鲜有报道。本研究通 与宫颈癌发生的关系。 l材料和方法 1．1材料 公司生产，胰酶为北京索莱宝科技有限公司生产(Solarbio)，血清为兰州民海生物工程有限公司生产 Real 的优级新生牛血清。RNAi醐mPlus(TaKaRaCode：D9108A)，PrimeScriptrMRTreagentKit(Perfect PremixEx Real Time)(TaKaRaCode：DRR037A)，SYBRII(PerfectTime)(TaKaRaCode： TaqTM DRR081A)均为宝生物工程有限公司生产。 1．2方法 1．2．1细胞培养 湿度的恒温培养箱中培养，细胞贴壁生长，每天换液一次，2—3天传代一次，取对数生长期细胞用于 实验。 1．2．2标本收集 收集西安交通大学第一附属医院妇产科经病理证实的手术标本共40例，其中宫颈癌标本20例。 取自良性肿瘤患者的宫颈组织20例，所用标本均经液氮速冻后置于一80℃保存。 1．2．3细胞与组织RNA提取 光光度仪测定总RNA的纯度及浓度。 1．2．4反转录成cDNA RT reagent Real Kit(Perfect 为MiR一21：GTCGTATCCAGTCAGGGTC 26： GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATr ．·——393．-一 CAGTGCAGGGTCCGAGGTAITCGCACTG CAGGGTCCGAGGTATrCGCACTGGATACGACA 1 25实时定量PcR 内参．每个样重复3个复孔．选择3个复孔差异性(1的数据作为有救数据。PCR引物如袭2所示。 GTC． TCACGAATrrGCCTGTCAT。 l 26统计学分析 实验数据用均数±标准差表示，用2q‘o法分析并且异iT检验，用SPSS统计软件分析实验数据。 2结果 2l MicmBNA的赛叶定量蛄秉 组织中嘣cmRNA的相对定量结果如表2所示，实时定量曲线如图l和图2所示。 寰l mIRNA实时定量PCR的CT值 miR一21 咖R—126 miR一373 U6 CT值 cr值 CT值 ∽值 cr值 176552± 23船59± 330720± 266888± 官颈密组织 2．9932 4 3黼7 4708I 23694 l 4080 209217± 198800± 3l8l∞± 2