高效液相色谱仪分析测试-科标分析.pdfVIP

高效液相色谱仪分析测试 系统组成 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储 液器中的流动相被高压泵打入系统 ，样品溶液经进样器进入流动相 ，被流动相载入色谱柱（固 定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时 ， 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程 ，各组分在移动速度上产生较大的差别 ，被分离成单 个组分依次从柱内流出 ，通过检测器时 ，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪 ，数据以图 谱形式打印出来。 工作原理 分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关 ，也与温度、压力有关。在不同的色谱 分离机制中 ，K有不同的概念 ：吸附色谱法为吸附系数 ，离子交换色谱法为选择性系数 （或 称交换系数），凝胶色谱法为渗透参数。但一般情况可用分配系数来表示。 在条件（流动相、固定相、温度和压力等）一定，样品浓度很低时（Cs、Cm很小）时 ，K 只取决于组分的性质 ，而与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件 ，在这种条件下 ，得到 的色谱峰为正常峰 ；在许多情况下 ，随着浓度的增大 ，K减小 ，这时色谱峰为拖尾峰 ；而有 时随着溶质浓度增大，K也增大，这时色谱峰为前延峰。因此，只有尽可能减少进样量 ，使 组分在柱内浓度降低，K恒定时，才能获得正常峰。 延伸 在同一色谱条件下 ，样品中 K值大的组分在固定相中滞留时间长 ，后流出色谱柱 ；K值小的 组分则滞留时间短，先流出色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大，越容易分离 ，因 此混合物中各组分的分配系数不同是色谱分离的前提。 在 HPLC中，固定相确定后，K主要受流动相的性质影响。实践中主要靠调整流动相的组成 配比及pH值，以获得组分间的分配系数差异及适宜的保留时间，达到分离的目的。 色谱 （highperformanceliquidchromatography,HPLC）也叫高压液相色谱 （highpressure liquidchromatography）、高速液相色谱（highspeed liquidchromatography）、高分 离度液相色谱（highresolutionliquidchromatography）等。是在经典液相色谱法的基 础上 ，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别 是填料颗粒小而均匀 ，小颗粒具有高柱效 ，但会引起高阻力 ，需用高压输送流动相 ，故又称 高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。 高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法 ，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液 泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成 ，其整体组成类似于气相色谱 ，但是针对其流 相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳 ；进样系统要求进样便 利切换严密 ；由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般 比较粗 ，长度也远小于气相色谱柱。HPLC应用非常广泛 ，几乎遍及定量定性分析的各个领 域。 使用高效液相色谱时 ，液体待检测物被注入色谱柱 ，通过压力在固定相中移 ，由于被测物 种不同物质与固定相的相互作用不同 ，不同的物质顺序离开色谱柱 ，通过检测器得到不同的 峰信号 ，最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重 要的分析方法 ，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱 没有本质的差别 ，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相 ，适于 分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。 色谱特点 高压——压力可达 150～300kg/cm2。色谱柱每米降压为75 kg/cm2以上。 高速——流速为0.1～10.0mL/min。 高效——塔板数可达5000/米。在一根柱中同时分离成份可达100种。 高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点： 速度快——通常分析一个样品在 15～30min，有些样品甚至在5min内即可完成。 分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng ，荧光和电化学检测器可达0.1pg。 色谱柱可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。 样品量少，容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。 主要类型 液固吸附色谱 1.1分离原理 液固色谱是基于各组分吸附能力的差异进行混合物分离的，其固定相是固体 吸附剂。 1.2固定相 ；吸附色谱