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罗布麻对红细胞膜脂质过氧化损伤的保护作用 【关键词】? ,罗布麻 　　摘? 要? 目的 研究罗布麻提取物对红细胞膜脂质过氧化损伤的保护作用。方法 采用三种活性氧产生体系诱发脂质过氧化为实验模型，设立模型对照组（MC），正常对照组（NC），以及剂量分别为0.1，0.2，0.4，0.8 mg/mL的四个罗布麻提取物给药组，观察比较各组的丙二醛（MDA）含量。结果 同MC组相比，四组罗布麻提取物对黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶系统，H2O2及UV照射三种方法引起的细胞膜脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的生成增加均有抑制作用，且有一定的剂量依赖关系。结论 罗布麻醇提物对自由基引起的细胞膜脂质过氧化损伤有保护作用。 　　关键词? 罗布麻；自由基；红细胞膜；脂质过氧化 、 　　细胞膜具有维持细胞完整性和功能的作用。因其富含饱和脂肪酸最易受自由基攻击，自由基对细胞膜的损伤主要是产生脂质过氧化反应，从而引起膜结构和功能的改变。因此，抗氧化剂可有效地防止自由基对细胞膜脂质的过氧化损伤。 　　罗布麻属于夹竹桃科植物（Apocynum venetum）,又名红麻，是生长在盐硷沙荒地区的野生植物，我国罗布麻的资源非常丰富，分布范围小，用罗布麻作茶饮及药用有悠久的历史。现代研究认为其可预防和治疗老年高血压、感冒、气管炎，对增强机体抗病能力均有一定的作用。罗布麻提取物的主要成分为黄酮类化合物［1］，而黄酮类化合物由于含有还原性酚羟基，可直接清除氧自由基，抑制脂质过氧化。本文观察了罗布麻提取物对体外黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶、过氧化氢（H2O2）和UV照射等三种自由基产生体系诱导细胞膜脂质过氧化的影响，报道如下。 　　1? 仪器与材料 　　1.1? 药物与试剂? 　　罗布麻叶购自武汉市药材公司，经鉴定为Folium apocyni Veneti。黄嘌呤（Xan）和黄嘌呤氧化酶（XO）为Sigma公司产品，考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒和丙二醛（MDA）测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所，其他试剂均为国产分析纯。 　　1.2? 动物? 　　大白兔购于华中科技大学同济医学院动物实验室 　　1.3? 仪器??　　UV-2201紫外分光光度计（日本岛津）、高速冷冻离心机（Sigma 公司） 　　1.4? 实验药物的制备［2］? 　　罗布麻叶100 g，用φ=70％乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，回收溶剂后，得到浸膏20.9 g。取该浸膏，用蒸馏水配成浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.8 mg/mL的溶液，经02 μm微孔滤膜过滤，4 保存备用。 　　2? 方法与结果 　　2.1? 方法 　　2.1.1? 红细胞膜的制备? 　　兔全血在0~4 用低渗溶血法［3］制备，膜蛋白含量用考马斯亮蓝试剂盒测定，得膜蛋白浓度0.098 g/L［4］。 　　2.1.2? Xan-XO 体系诱导细胞膜脂质过氧化? 　　各取细胞膜悬液（0.098 g/L）0.5 mL，分别加待测药物01 mL（对照加pH 7.8磷酸盐缓冲液），置37 水浴15 min，再加1.0 mmol/L Xan溶液0.3 mL，0.4 U/mL XO 0.1 mL, 立即将反应管置37 水浴1 h待测。 　　2.1.3? H2O2诱导细胞膜脂质过氧化? 　　以2 mol/L H2O2 (终浓度为18 mmol/L) 代替 Xan-XO，用pH7.8磷酸盐缓冲液补充反应体系的体积至1.0 mL，其余条件同“2.1.2”项。 　　2.1.4? UV照射诱导细胞膜脂质过氧化? 　　反应终体积为1 mL，内含细胞膜0.5 mL及不同浓度的药物或等体积的磷酸盐缓冲液，反应管置紫外灯下照射1 h后待测。 　　2.1.5? 脂质过氧化物的检测? 　　采用MDA试剂盒测定,测定过氧化脂质降解产物中的丙二醛（MDA）含量以反映脂质过氧化程度。 以下式计算罗布麻对反应体系诱导MDA生成的抑制率：抑制率=对照组MDA含量-给药组MDA含量[]对照组MDA含量-正常组MDA含量×100％ 　　2.1.6? 统计学处理? 　　MDA数值采用s的形式，多组资料间的两两比较用t检验，P0.05认为有显著性差异。 　　2.2? 结果 　　2.2.1? 罗布麻醇提物对Xan-XO体系诱导细胞膜脂质过氧化生成的影响? 　　结果表明，Xan-XO系统可诱导细胞膜发生脂质过氧化反应，使对照组的MDA含量明显升高（P 0.001）；四个罗布麻组的MDA值较对照组均有显著下降，并有一定的剂量依赖关系（P 0.001,P 0.01）。见表1。表1? 罗布麻对Xan-XO诱导细胞膜脂质过氧化生成的影响（略） 　　2.2.2? 罗布麻醇提物对H2O2诱导细胞膜脂质过氧化生成的影响??　　结果表明，H2O2可诱导细胞膜脂质过氧化反应，使对照组的MDA含量明显