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普通生物学实验报告 实验名称： 烟草叶片的组织培养 实验原理： 植物细胞具有全能性。植物组织中原本已经分化的细胞，一旦脱离原有的机体环境，成为离体状态，在适宜的营养和外界条件下，会发生脱分化，成为重新具有分裂能力的细胞，并生长发育为完整的植株。 愈伤组织是指一个离体的细胞、组织或器官，通过脱分化不断分裂，增生子细胞，这些细胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了结构无序的细胞团。 培养基中生长素、细胞分裂素浓度比不同，可以诱导烟草叶片生根或生芽。 实验材料及用具： 材料：无菌烟草叶片 试剂：MS培养基母液 、0.5mol/L NaOH、1mol/L HCl、0.1mg/ml NAA、0.1mg/ml 6-BA、0.1mg/ml 2,4-D 用具：超净工作台、高压灭菌锅、培养箱、电子天平、移液器、手术器械、30ml烧杯、500ml烧杯、药匙、玻璃棒、100ml培养瓶、高压橡皮筋、试纸（pH5.4-7)、报纸等 实验步骤： 诱导培养基的配制 ①向烧杯中加入15mlMS母液，加入100ml蒸馏水 ②称量4.5g蔗糖，加入烧杯 ③用蒸馏水粗略定容至150ml ④分瓶，每瓶30ml ⑤加植物生长调节剂 对照组（t0) 无 诱导生根组（t1) 0.03ml 6-BA+0.15ml NAA 诱导生芽组 (t2) 0.15ml 6-BA+0.03ml NAA 诱导生愈伤组(t3) 0.03ml 2,4-D ⑥调节pH至5.8 ⑦加琼脂，每瓶0.24g 灭菌 培养基、剪子、镊子、平皿需在120℃的高压灭菌锅中灭菌15分钟 接种前打开无菌间和超净台紫外灯，照射30分钟 用肥皂清洗手和手腕 进入无菌间，先用70%酒精喷手。关掉无菌间棚顶紫外灯，打开超净台风机，关掉超净台上的紫外灯 接种 坐在超净工作台前，用70%酒精棉球擦拭双手和超净台面 待手上的酒精干了，点燃酒精灯 将培养瓶的盖子旋松，但不要打开，放到无菌风道侧面备用 将镊子，剪子在酒精灯外焰上灼烧，冷却后，剪取叶片约1cm2。将剪好的叶片均匀铺在培养基上，每瓶放入三片，间隔相等 盖好瓶盖，不必太紧，瓶上做好标记 培养 将培养瓶放入培养箱中，培养四周，25℃，湿度70%-80%，光照16h,暗8h 实验结果： 时间 组别 t0 t1 t2 t3 培养前 培养4周后 实验讨论： 蔗糖既是碳源，又起到维持渗透压的作用。 调节pH应准确。若pH过低，会导致培养基不凝；若pH过高，则会导致培养基过硬。 琼脂粉是固化剂，支持物。它在冷水中并不溶解，在高温下自然会溶解，所以加入后不必为了使之溶解而搅拌。 无菌操作时不要讲话，以免污染。 用酒精擦手后，要等其彻底挥发后在点燃酒精灯，以免火焰伤手。 剪取叶片时要尽量避开主叶脉，并保证叶片的四边都是剪出的伤口。 将叶片铺在培养基上时，要注意叶片下表面与培养基接触，不要弄反。 无菌操作的整个过程中，叶片都不能接触双手和台面，镊子、剪子也要放在平皿上，若掉落在台面上，要再次灼烧，以保证操作的无菌性。