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高效液相色谱法的应用 一、实验目的 了解高效液相色谱仪的结构以及使用方法。 掌握根据保留值、利用标准样品进行定性分析的方法，了解影响保留值的因素。 掌握色谱定量分析的原理，练习用标准曲线法定量测定混合物组分的含量。 二、实验原理 高效液相色谱仪是利用混合物中各组分在流动相和固定相中具有不同的吸附和脱附能力，当两相做相对运动时，样品中各组分在两相中受到吸附和脱附力的反复作用，从而使混合物中各组分得到分离。根据各组分的色谱峰高或峰面积，即可求出各组分的含量。 三、仪器与试剂 仪器: BFS5100高压液相色谱仪；UV检测器 试剂: 咖啡因（分析纯）；三氯甲烷（分析纯） 四、色谱条件 色谱柱: ZYll04 ； 流动相: 甲醇:水 = 40:60 ；流量: 1mL／minnm 五、实验步骤 称取0.1000克的纯咖啡因，用分析纯的三氯甲烷定容于100mL的容量瓶中，分别取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL于50mL的容量瓶中，用三氯甲烷稀释至刻度，过滤后分别测取各标样的保留时间及色谱峰面积，绘制工作曲线。 准确称取0.3克茶叶，用30mL蒸馏水煮沸10min，冷却后，将上层清液移至100mL容量瓶中定容，取25ml此液于分液漏斗中，加入 lmL 1mol(L-1 的NaOH 溶液，然后用氯仿萃取，并用氯仿定容至25mL（此为未知液）。 测取未知液的图谱，计算未知液中咖啡因的含量。 思考题： 用标准曲线法定量的优缺点是什么？ 若标准曲线用咖啡因浓度对峰高作图，能给出准确结果吗？与本实验的标准曲线相比何者优越？为什么？ 气相色谱分析的应用 实验目的 1. 了解气相色谱仪的构造及使用方法。 2. 熟悉相对定量校正因子定义及求取方法。 3. 熟悉内标法定量公式及应用。 实验原理 内标法就是把标准物质和被测混合物放在一起进行分析，在同一张色谱图上得到样品和标准物质的色谱峰，原后根据样品重量（mi）和内标物重量（ms）及组分和内标物的峰面积（Ai和As）按下式求出组分的含量: 式中 Pi%是被测物的百分含量; Fw是相对校正因子，是被测物的校正因子与标准物质的校正因子之比。 仪器与试剂 仪器： SP3420型气相色谱仪；CY500—2型氢气发生器；SPB—3全自动空气源；毛细管色谱柱；氢火焰离子化检测器；微量注射器，秒表。 试剂：乙酸正戊酯、乙醇、甲醇、正丙醇、正丁醇（均为分析纯） 实验步骤 实验条件：柱温80℃；气化温度150℃；检测器温度150℃；载气：氮气，0.1MPa；氢气和空气的流量分别为50ml/min和500ml/min。 标准溶液制备：在10mL容量瓶中预先放入约3/4的40％的乙醇水溶液，然后分别注入4.0μL乙酸正戊酯、乙醇、甲醇、正丙醇、正丁醇，并用40％的乙醇水溶液稀释至刻度，混匀。 加标样品的配制：预先用低度大曲荡洗10mL容量瓶，移取4μL乙酸正戊酯至容量瓶中，再用低度大曲稀释至刻度，混匀。 分别注入1.0μL标准溶液，用色谱仪分离，记下各组分的保留时间，重复两次。 注入1.0μL样品进行分离。 结果处理 确定样品中应测组分的色谱峰位置； 计算以乙酸正戊酯为标准的相对定量校正因子； 计算样品中各需测组分的含量。 思考题： 气相色谱与液相色谱有什么异同？ 内标法定量有什么优缺点？ 原子吸收分光光度法的应用 实验目的 了解原子吸收分光光度计的结构和使用方法。 掌握标准曲线法和标准加入法的定量分析方法。 实验原理 在高温状态下，大多数元素的原子处于基态，当用一个含有待测元素的空心阴极灯发射其共振谱线通过基态原子时，基态原子会吸收其特征谱线，其吸光度与被测元素的原子的浓度成正比。 仪器与实验条件 仪器：3200原子吸收分光光度计；乙炔气瓶；WM-2A型无油气体压缩机。 实验条件：检测波长：324.7nm； 灯电流：6mA；狭缝宽度：2 ?；空气压力：2 kg/cm2，流量：6.5 L/min；乙炔压力：0.5 kg/cm2，流量1~3 L/min。 实验步骤 标准曲线法 用移液管分别移取铜标液（100 μɡ/mL）1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL至100 mL的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，分别测定其吸光度值和未知液的吸光度值，作出标准曲线，并计算出未知液的浓度。 标准加入法 用移液管分别取25.0 mL未知液于5个100 mL的溶量瓶中，然后分别加入标准液0，1.0，2.0，3.0，4.0 mL，用水浠释至刻度，分别测定其吸光度值，然后用标准加入法求出未知液的浓度。 C7H6O： 实验讲义 第 - 3 - 页