7吸光光度法 - 副本.pptVIP

依据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法。 许多物质本身有颜色 如:Mn2+(浅肉色)→MnO4-(紫红) 一、光的基本性质 二、朗伯-比耳定律 吸光系数a(L·g-1·cm-1)相当于浓度为1g·L-1 ，液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。 一、主要部件 一、显色反应及显色条件的选择 可见,在不同的读数范围内,由读数A引起的误差是不同的. 一、示差分光光度法（示差法） 第六章 可见分光光度法思考题 1．朗伯-比耳定律的物理意义是什么？写出其数学表达式。 2．摩尔吸光系数ε的物理意义是什么？其大小与哪些因素有关？ε在分析化学中有何意义？ 3．什么是吸收曲线？什么是标准曲线？它们有何实际意义？ 4．显色反应如何选择？ 5．吸光度测量条件如何选择？ 6．光度分析法中，参比溶液应如何选择？ 7．示差光度法的测定原理是什么？如何用示差光度法进行定量分析？ 答案 图12-10 吸光度测定条件的选择 曲线A为钴络合物的吸收曲线 曲线B为显色剂的吸收曲线 §5 分 光 光 度 法 的 建 立 §5 分 光 光 度 法 的 建 立 参比溶液的选择一般遵循以下原则： ⑴若仅待测组分与显色剂反应产物在测定波长处有吸收，其它所加试剂均无吸收，用纯溶剂（水)作参比溶液； ⑵若显色剂或其它所加试剂在测定波长处略有吸收，而试液本身无吸收，用“试剂空白”(不加试样溶液)作参比溶液； ⑶若待测试液在测定波长处有吸收，而显色剂等无吸收，则可用“试样空白”(不加显色剂)作参比溶液； ⑷若显色剂、试液中其它组分在测量波长处有吸收，则可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂，作为参比溶液（褪色空白）。 褪色空白 有 色 有 色 试液空白 有 色 试剂空白 （不加试液） 有色 无色 无色或 有色 溶剂空白 无色 无色 无色 无色 一般 参比液 显色剂 试液 试剂 溶剂 参 比 溶 液 §5 分 光 光 度 法 的 建 立 3.控制适宜的吸光度读数范围 吸光度在0.2～0.8 透光率 15%～65% A=0.434 或T=36.8% 测量的相对误差最小 §5 分 光 光 度 法 的 建 立 四、标准曲线的绘制 标准曲线法绘图示例： A ~ c 或 A ~ ? c单位mol/L ?单位 g/L 、mg/L、 ?g/L §5 分 光 光 度 法 的 建 立 0.2 0.8 0.4 0.6 A 0 1 2 3 4 5 ? mg·L-1 工 作 曲 线 §5 分 光 光 度 法 的 建 立 一、偏离朗伯—比耳定律的原因 标准曲线法测定未知溶液的浓度时发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯-比耳定律的偏离。 引起这种偏离的因素（两大类）： 一类是物理性因素，即仪器的非理想引起的；另一类是化学性因素。 §6 分 光 光 度 法 的 误 差 A c 1.物理性因素 朗伯-比耳定律的前提条件是入射光为单色光。分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯-比耳定律的偏离。 非单色光、杂散光、非平行入射光都会引起对朗伯-比耳定律的偏离。 §6 分 光 光 度 法 的 误 差 ｜Δε｜很小时，则可近似认为是单色光。为克服非单色光引起的偏离，首先应选择比较好的单色器。此外还应将入射光波长选定在待测物质的最大吸收波长且吸收曲线较平坦处。 §6 分 光 光 度 法 的 误 差 2.化学性因素 §6 分 光 光 度 法 的 误 差 朗伯-比耳定律建立在均匀、非散射溶液的基础上 当被测溶液是胶体、悬浮液等时,入射光除被吸收外,还有一部分光因散射而损失,使透光率降低,使吸光度比真实值偏大,发生偏离(一般为正偏离) (1) 介质的不均匀性 (2) 由化学反应引起 的偏离: §6 分 光 光 度 法 的 误 差 如化学因素引起的有色物质的离解、缔合,产生新的物质,改变了吸光物质的浓度,引起偏差. 朗伯-比耳定律假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用，实验证明，这种假定只有在稀溶液时才基本符合。 当溶液浓度c 12mol·L-1时，吸光质点间可能发生离解、缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收。朗伯-比耳定律只适用于稀溶液。 3.工作曲线不过原点 存在系统误差： 吸收池不完全一样； 参比溶液选择不当等