猪粪除臭微生物菌株的氮离子诱变选育.pdfVIP

AnimalHusbandry＆ Veterinary Medicine 2009 Vo1．41 No．1I 猪粪除臭微生物菌株的氮离子诱变选育 陈丽园，吴 东，夏伦志，周 芬 (安徽省农业科学研究院畜牧兽医研究所，安徽 合肥 230031) 摘要 ：利用低能N注入技术对具有除臭作用的菌株 10MG进行诱变选育，以进一步提高该菌株的除臭性能。采用60x2．6xlO”ions／cm2的N+注 入剂量进行诱变，通过筛选编号为D63的菌株对于氨气的降解率达76．14％，比出发菌的降解率提高了10．84％；硫化氢的降解量达32．38％，比 出发菌提高了7．83％。变异菌株经传5代培养，其除臭效果稳定。 关键词 ：畜禽养殖废弃物；除臭微生物；N注入；诱变选育 中图分类号：$81l 文献标识码 ：A 文章编号：0529-5130(2009)11-0050—03 畜禽养殖场规模化、集约化的发展造成了畜牧业 PDA培养基_5J：马铃薯 200g，蔗糖20g，水 粪便的集中排放，产生的恶臭对周边大气造成了严重 1000mL，pH 自然，121℃下灭菌 20min。 的污染。目前，有多种物理、生化方法用于治理畜禽 粪浆培养液：新鲜猪粪200g，水800mL，混匀 粪便的恶臭，但都有缺点，或成本高，或除臭专一性 后，单层纱布过滤，滤液于 121℃下灭菌20min。 强，或牺牲部分肥力或者难 以大规模应用 ¨J，因此 1．2 低能N 离子注入工艺与样品处理 国内外有的研究学者将粪便除臭转移到微生物处理这 取新鲜活化斜面，用无菌水洗脱后制成孢子悬 一 方法 。 液，适当稀释后均匀涂布于无菌平皿，放置于超净工 微生物除臭的关键在于高效的微生物菌株的选 作台，用无菌风吹干，利用中国科学院等离子体物理 育。一般菌株来 自于 自然环境中，但其发酵活力往往 研究所的低能离子注入设备进行离子注入诱变，选用 比较低 。发酵工业上常诱变 自然菌株以提高发酵产物 能量为 10keV的N离子，束流强度为 15mA，注入 收率和品质。但传统诱变方法的多次诱变往往导致负 齐0量为 0，20×0．26×10 ions／cm ，40×0．26×10 i- 突变和抗性饱和，而离子注入却能打破此瓶颈，获得 ons／cm ，60~0．26~10 ions／cm ，80x0．26x10 ions／ 以目标产物为 目的的高产、优 良菌株。因此离子注入 cm ，100x0．26×10 ions／cm ， 120x0．26×10 ions／ 法在作物和微生物诱变育种方面受到广泛关注。陈丽 cm 。注入靶室的真空度为 10 Pa，采用脉冲注入， 娟等 对产复合酶益生菌黑曲霉 ANO1进行多次 N 每个脉冲5S，间隔为50S。注入之后，分别用 1mL 注入诱变处理，使黑曲霉出发菌株的酸性蛋白酶提高 无菌水洗脱，适当稀释，各取 0．1mL涂布于PDA固 12．6倍，纤维素酶提高5．6倍，果胶酶提高2．4倍， 体培养基，每个稀释度涂布 3—5个平板，恒温 且产酶性能稳定。刘梅等 对产霉酚酸的短密青霉 28℃，倒置培养72h后进行菌落计数，计算存活率。 菌M一51进行N注入诱变，在剂量为 140~2．6x10Bi． 1．3 猪粪除臭微生物突变菌株的筛选 ons／cm 时，菌株变异率及正变率均最高，分别达到 1．3．1 初 筛试验 88．9％和63．4％。因此本研究利用 N注入诱变的方 以60~0．26x10 ions／cm 的剂量进行离子注入， 式对从 自然环境中分离的除臭微生物进行诱变，以提 稀释培养出单菌落后，将各菌落进行编号，并接到5 高其除臭能力，为得到高效、稳定的除臭微生物探索