猪囊尾蚴磷蛋白在毕赤酵母中的表达及初步应用.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ()* + ! ,) +# 年 月 $%% ’ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 -.*/ $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 猪囊尾蚴磷蛋白在毕赤酵母中的表达及初步应用 苏彩霞 才学鹏 韩雪清 骆学农 郑亚东 窦永喜 （中国农业科学院兰州兽医研究所，兰州 ’%%#1 ） 摘 要 将猪囊虫磷蛋白 基因克隆到毕赤酵母表达系统分泌性表达载体 中，构建了重组表达载体 E$ EFGH 。经测序证明基因序列完全正确，从而大量制备重组质粒 ，并用 、 两种内切酶分别 EFGH0E$ EFGH0E$ 3+, ! .1, 线性化，然后分别电转化毕赤酵母菌种 ，采用 抗性梯度筛选得到高拷贝重组菌株，利用 和 培养 3I!!2 3#!6 JJ JK 基鉴定重组菌株 表型，然后用甲醇进行诱导表达；并对表达产物通过 、 和 分析，结 J.L IKI0EM3: N5CL5OD0@*)L :PFIM 果表明，重组菌株成功地分泌表达了分子量大小为!$ Q1RK，表达量占分泌总蛋白的S ，且具有免疫反应活性的重 组磷蛋白，从而解决了囊虫病诊断抗原来源问题并为研制新型猪囊虫疫苗奠定了基础。 关键词 猪囊尾蚴，磷蛋白基因，毕赤酵母，分泌型表达，诊断抗原 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） T’61 M !%%%0%1! $%% %#0%#$#0%# 囊虫病（ ）是由猪带绦虫（ 猪囊虫磷蛋白 在毕赤酵母表达系统中分泌表达 G/CL=5O=)CC 4+%$#+ (,#5 E$ )6 ）的幼虫———猪囊尾蚴（ ）感染 的可行性，并研究了重组磷蛋白作为诊断抗原的可 !2/#0%*0) 0%,,),(+% 猪或人而引起的人畜共患寄生虫病，猪是最主要的 能性，从而解决了囊虫病诊断抗原来源问题并为猪 中间宿主，人不仅是中间宿主，而且是唯一的终末宿 囊虫的其他功能性抗原基因在此系统中的表达，研 主，囊虫病在我国流行广泛，严重危害人体健康，并 制猪囊虫病诊断试剂盒及基因工程疫苗打下了良好 制约着养猪业发展。目前关于囊虫病的防治还未有 的基础。 成熟的手段，过去的化学药物治疗以及虫体抗原免 ! 材料和方法 疫都已经暴露了很大的局限性。研究资料表明磷蛋 ［］ 白参与蛋白质的合成! ，并且与自身免疫密切相 ! !