柞蚕蛹及胚胎发育中几种同工酶基因的表达研究.pdfVIP

维普资讯 ／ 动 物 学 研 究 1996，17 (3)：239246 CN 53-1~4o／Q ISSN 0254-5853 ZoologicalResearch 柞蚕蛹及胚胎发育中几种 同工酶基 因的表达研究 (山东大学生物系济南250l00) -—、‘0乙，)．’／f ，f 一／ ，_卜 摘要 本文通过聚丙烯酰胺凝肢电泳浩研究了柞蚕蛹及胚胎发育过程 中酯酶、苹果酸脱 ’氢酶 、乳酸脱氢酶和超氧化物歧化酶等几种同工酶 的表达模式。结果表明，苹果酸脱氢酶和 超氧化物歧化酶在蛹脂肪体、血淋巴、卵母细胞以及胚胎发 育中均表达}乳酸脱氢酶只在蛹 脂肪体 中测到，而在血淋巴和卵母细胞 中没有测到，但在胚胎发育晚期 获表达j酯酶在脂肪 体中获强表达，但在血淋巴和卵母细胞 中表达很弱，在胚胎发育过程 中仅在晚期得到鞍充分 表达。胚胎发育 中未检测到胆碱酯酶，与抗性有关的羧酸酶酶、过氧化物酶和过氧化氢酶在 蛹血淋巴、脂肪体及胚胎发育中均未检测到。该研究提供 了正常生理状态下柞蚕蛹及胚胎发 育过程 中几种同工酶基因表达的一般模式，为研究鳞翅 目昆虫同工酶积累了资料。 弱角， 同工酶f基因表达 ， 性 昆虫体 内存在 多种 同工酶 以维持正常的生命活动。在抗性 昆虫 中某些 同工酶活性增 强，或出现新的同工酶，使农药分解，从而产生抗药性并遗传给后代，如亚洲玉米螟抗呋 喃品系和抗杀灭菊醣品系的羧酸酯酶区带较感性 品系增加 (尚稚珍等，I990)；棉铃虫抗 氰戊菊酯品系的翔酸酯酶比活较感性品系明显增加 (王开运等，I994)。翔酸酯酶可以水 解马拉硫磷的翔酸己酯基，使其成为无毒的单酸 (Rockstein，1988)。昆虫体内的超氧化 物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶也与抗性有关 (李周直，I994)。此外，多功能氧化 酶和谷胱甘肽转移酶也与 昆虫抗性密切相关。而胆碱酯酶则属于农药作用的靶标酶，有机 磷酸酯和氨基 甲酸酯类化学农药均为抗胆碱酯酶剂，可抑制乙酰胆碱酯酶，使神经递质乙 酰胆碱不能被分解，从而引起神经系统的严重障碍导致虫体死亡。 在正常生理状态下与抗性有关的同工酶基因可能有的表达，有的不表达，有的则弱表 达。在农药的选择压力作用下，一些与抗性有关的同工酶基因可能被激活或扩增。阐明正 常生理状态下昆虫体 内同工酶基因表达的一般模式及规律，对研究害虫抗性产生及治理具 重要意义。但 由于大量施用化学农药，一些重要害虫的感性品系不易获得，难以进行该项 研究，而柞蚕属于鳞翅 目昆虫，卵粒大，一次产出，胚胎发育期长，加之未经农药选择， 是进行该项研究的理想实验材料。 由柞蚕所获得的结果可作为其它鳞翅 目昆虫正常生理状 态下 同工酶基 因表达的参考模式 。 ·周亲教委留学回国人员基盘资助项 目 本文 1995年 6月 19日收剜，同年9月 12日倍回 维普资讯 动 物 学 研 究 17卷 l 材料及方法 l_1 材料 柞蚕蛹采 自山东省烟台市；聚丙烯酰胺凝胶 电泳试剂为国产分析钝试剂；各类同工酶 用试剂购 自北京化学试剂公司。 1．2 方法 1．2．1 样品制备 取柞蚕蛹雌、雄各 lO头，取血淋 巴和脂肪体 。血淋 巴离心 10min， 1500r／rain，取 上清 液备 用j 脂肪 体 由 TBS (O叭 mol／L Tris—HCl缓 冲生 理盐 水 pH7) 漂洗 两 次 ，再 由缓 冲 液 A(0．O1mol／L Tris—HCI缓 冲液 ，pH7， 1mmol／L EDTA 和 1mmol／L巯 基 乙醇)漂洗 1次，加入 1ml缓冲液 A 匀浆，离心 10min， 12000r／rain，取上清液备用。卵母细胞匀浆液 以充分生长的剖腹 卵加