斜鳞蛇核型高分辨显带及减数分裂的观察.pdfVIP

维普资讯 1}6e6) 弓一 乙 动 物 学 研 究 1994，15 (3)： 32 CN 53-1040／Q ISSN 0254—5853 ZoologicalResearch 斜鳞蛇核型高分辨显带及 减数分裂的观察 王蕊芳 贺维顺 伸 酣 鞴 昆鹏 昕究 睨。” z ．弓 摘要 本文报道 了斜鳞蛇 (Pseudoxenodonmacro 的核型和银带 。二倍俸数 目2n=36，其 。 中包括 8对大染色俸(6对 中着丝粒染色体，2对亚 中着丝粒染色俸)和 10对小染色俸。其核仁 组织区(NORs)位于第 1对小染色俸末端。并采用 TdR BrdU 处理方法 ，显示斜鳞蛇复制带， 实验证 明，用大剂量的胸腺嘧啶核苷 (Tcm)阻断细胞周期，再以BrdU渗入 S期细胞 中复制的 染色体区域，并显示带纹。同时还对斜鳞蛇的减数分裂进行了观察。 美键词r————一 旦——兰一复制带，————竺——— ’者J 我省地形、地貌多种多样，气候复杂，物种多样性以及与此相关联的遗传多样性十分 丰富。种内遗传多样性的保持有助于保持物种和整个生态系统的多样性。我省动物种类丰 富，仅爬行类 占垒国种类 45％ 左右。研究其染色体是遗传多样性范围之一。 斜鳞蛇 (Pseudoxenodonm口cro 属游蛇亚科 (colubrinae)斜鳞蛇属。国外分布于尼泊 尔、印度、越南，国内广泛分布 于福建、广西、湖南、湖北、四川、贵州、云南等地(浙 江医科大学等，1980)。 目前 ，有关蛇类染色体研究工作 国内外报道较少，尤其带型的显示更为 困难 ，因此， 至今蛇类染色体研究工作难 以进一步操入 。据我们查阅的资料 ，有关斜鳞蛇的核型和带型 国内外现 尚未见报道。本文对斜鳞蛇的染色体、带型和减数分裂作初步观察分析，以期对 探索蛇类分类、系统发生和种类分化提供新的线索。 l 材料和方法 实验动物 ：2 S，采 自昆明西郊花红洞。 1．1细胞培养殛染色体制备 1．1．1培养基组成 8O％ RPMIl640+20％ 小牛血清 +双抗。 1．1．2细胞培养及染色体制备 在无菌条件下，取 出动物心脏，以含有双抗的磷酸盐平 衡液 (PBS)洗若干次，在培养基 中剪碎，贴壁，放于 26℃培养箱 中培养，细胞传 若干代 后待用。传代细胞培养 96h加秋水酰胺溶液 ，最终浓度为 0．O4pg／ml，继续培养 l2— 13h，常规空气干燥法制片，10％ Giemsa染色 15rain。观察摄影后标本以 固定液褪色， 本文 I993年 8月7日收到，同年 12月 2日修 回 维普资讯 动 物 学 哥I 究 l5卷 按 Howell和 Black(1980)快速银染法制备 NORs。 I．2高分辨显带方法 1．2 1传代 细 胞 培养 96h， 以大剂 量 TdR 阻 断细 胞 的 复 制 ，TdR 的最 终 浓度 为 0．5mg／ml，阻断 17—20h后 ，用 Ringer液 洗涤 细胞 两 次 ，换 入 培养 基 ，井 加入 BrdU，最终浓度为 3O一50g／ml，继续避光 培养 7— 8h，终 止培养前 2h加秋水酰胺 (最终浓度为 0，o4 g／m1)。空气干燥法制片。 1．22显带步骤 上述制片在室温下至少避光放置 24h后 ，将玻片放入盛有 1×SSC溶 。 液的培养皿中，制片的表面盖上一张擦镜纸，用 1×SSC液将其湿润，放于 20w 紫外灯 光下垂直照射 2Q一