化痰散结方(含药血清)对人肺癌细胞中Bcl-2＇Bax＇P16基因表达影响研究.pdfVIP

32 第^届全国中西医结合肿瘤学术会议论文桌 反而加重病情，更不能延长生存时间。中药可以稳定病情，改善生活质量，防止复发转移。mi床证明， 肺癌平对肺癌的治疗是有效的。当然，对于晚期低分化肺腺癌也可适当配合化疗。若不敏感．应停止 化疗。非小细胞肺癌术后应根据病理分型合理化疗，对于高分化型不应化疗。术后病人也应裹以中药 治疗为主，提高机体免疫功能，防止复发转移。 我们的临床总结为回顾性总结，今后我们要进行前瞻性随机临床观察研究。 化痰散结方(含药血清)对人肺癌细胞中 Bc卜2、Bax、P1 6基因表达影响的研究 杨勤建 雷良蔚 湖北中医学院(武汉430061) 近年来分子生物学的研究结果表明：肿瘤的发生、发展与癌基因、抑癌基因的异常调控习!达密切 相关。本文用血清药理学和免疫组化方法观察了中药化痰散结方对人肺癌细胞(sPc—A1)中bc卜2、bax、 P16基因表达的影响情况，昌在探讨中药化痰散结方的抗肿瘤作用机理。结果报告如下。 1．材料与方法 1．1含药血清的制各 (1)动物：纯种新西兰家兔7只。雄性，体重2．5～3．0kg，由湖北省医药工业研究所动物!差提供。 (2)药物：化痰散结方由半夏、天南星、三七、马钱子等中药组成，生药由湖北省药材公司饮片 厂提供，按工艺制成19／m1的浸膏备用。 (0)血清制备方法：用实验兔5只，每日给予化痰散结方浸膏79／kg灌胃，10日后，于局后1次 灌胃后1h(灌药前禁食不禁水12h)，乙醚麻醉，颈动脉采血，无菌分离血清，同种条件下将5只兔的 血清混匀，56℃、30min处理，置一20℃冰箱保存备用。另2只兔，给予相同剂量的生理盐水灌胃，喂 养时间、血清采取方法同前。 1．2人肺癌细胞的培养 (1)人肺癌细胞(sPc-A，)：由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供。 ’ (2)试剂：蹦嘣培养液、胎牛血清由美国Gibco公司购买。 (3)培养方法：用24孔培养板，每孔中置放一小块无菌的玻片，每组3孔，将传代的SPl：_A。接 o 37℃培养箱中培养24h，至细胞呈对数生长。 1．3含药血清对sPC—A，中bc卜2、bax、P16基因表达的影响。 (1)试剂：bc卜2鼠单抗、bax兔多抗、P16兔多抗，链霉菌素抗生物素蛋白一过氧化酶免疫组化 染色试剂盒(加强型、含封闭血清和=抗、三抗)、DBA酶底物显色试剂盒购自福建迈新公司。 无含药血清的浓度与分组同上。 第八届全国中西医结合肿瘤学术会议论文集 33 培养液各1m1，置培养箱中培养24h．去含药血清的培养液，加入单纯的跚酬培养液再分别培养12h、 24h、48h；无含药血清的细胞培养方法相同。 下孵育5min，PBs洗涤1次，分别加入bcl一2、bax、PL6一抗，室温下作用2h；PBs洗涤3次，滴入生 物素标记的二抗，室温下作用】Omin：滴入链霉菌抗生物素蛋白一过氧化酶溶液，室温下作用10mjn； PBs洗涤3次，滴入新鲜配制的DAB显色溶液，在光学显微镜下观察显色效果，显色明显即停止。用自 来水冲洗，苏木素复染，中性树胶封固，光学显微镜卜摄影。 2．结果 明显加深(图片略)。 3．讨论 目前对肿瘤发生机制的认识不仅涉及肿瘤细胞的失控性增殖，而且与细胞凋亡的调节失衡有关。 有资料表明：细胞分裂和细胞死亡的相对比率可以决定癌的生长速度。细胞的凋亡又受许多基因的调 控，有的基因抑制细胞凋亡，有的基因则促进细胞凋亡。 基因最初发现于滤泡型B细胞淋巴瘤并证明为染色体易位的结果，转基因实验结果表明：bc卜2基因有 致癌性，其致癌生长并非通过促进细胞增殖引起，而是由于细胞凋亡受抑制造成肿瘤细胞的堆积。现 已在多种组织来源如乳腺、脑、胃、膀胱、卵巢以及急性白血病等的良、恶性肿瘤中发现