疏肝活血法对下肢缺血模型大鼠血管内皮祖细胞影响的实验的研究.pdfVIP

中国中西医结合学会周围血管疾病委员第七届换届暨学术交流会 论文集 疏肝活血法对下肢缺血模型大鼠血管内皮祖细胞影响的实验研究 黄学阳1林鸿国1王建春1李彦彬2仉玮1刘明1蔡炳勤1 1．广东省中医院血管外科；2．广州中医药大学 下肢缺血性疾病是指冈动脉狭窄或闭塞而引起的一系列疾病，其最典型的症状为间歇性跛行，严重 者会出现缺血性静息痛、肢端缺血性溃疡和坏疽，甚至导致截肢，严重影响患者生活质量。现代研究表 明。血管内皮祖细胞(endothelial endothelial factor，VEGF)等细胞因子，促进缺血组织的血管新生和侧枝血管形成，进而促进缺血组织的 growth 修复，这为缺血性疾病的深入研究提供了新的思路。在长期的临床实践中发现，中医疏肝活血法对治疗 下肢缺血性疾病有着良好的疗效，但其治疗机理目前尚不明确。本研究通过建立大鼠下肢缺血模型，采 用中药干预，观察其外周血EPC的变化，并尝试从血管新生的角度探讨中医疏肝活血法对促进缺血肢 体修复的可能作用机制。 1．材料与方法 1．1实验动物及主要试剂 SCXK(粤)2003．0002，粤监证字2008A020。 C1 108：IgGl．FITC同型对照抗体，由美国Molecularp 照抗体，由美国SantaCruz公司生产，批号：E3008：红细胞裂解液由广东省中医院中心实验室提供。 1．2模型制备与分组 实验动物随机分为三组，中药组(A组)20只，模型组(B组)20只，正常对照组(C组)10只。 切口，紧贴腹股沟下方分离股动脉主干，中药组和模型组行右下肢股动脉结扎及分支剔除术，造成下肢 血管缺血模犁；对照组仪暴露股三角，不结扎股动脉及其分支。 中药组术后按照O．Iml／1009灌服以下制备药物，每天1次，连续7天。模犁组和对照组不予给药。 中药制各：柴胡疏肝散(陈皮69、柴胡69、川芎魄、香附69、枳壳69、芍药99、炙甘草39)合 灭菌，4℃冰箱保存备用。 1．3观察指标 1．3．1酶学检查设置术前l天，术后l、3、7天共4个时点，各组在对应时点经眼眶静脉丛采 全血各lml，血标本由广东省中医院检验科统一检验，用酶动力学法检测外周血肌酸激酶(CK)、乳酸脱 氢酶(LDH)、a-羟丁酸脱氢酶(HBDH)、谷草转氨酶(AST)。 1．3．2 CD34+、VEGFR2+的测定按照上述相同时点采样，采用双色荧光标记流式细胞检测法， 观察人鼠外周血双荧光阳性细胞(CD34+、VEGFR2+)的比例变化。 双色荧光标记流式细胞检测法：①每只大鼠各设置1个测定管与同型对照管，每管取EDTA抗凝 型对照管加相应的两种同型对照抗体，室温避光孵育15mira③每管加500ul红细胞裂解液，室温避 300ul重悬，上机检测。以488 荧光阳性细胞所占比例。每个标本rlI测定管的双荧光阳性细胞比例减去对照管的双荧光阳性细胞比例， 一155— 中国中西医结合学会周围血管疾病委员第七届换届暨学术交流会 论文集 即为该标本实际的双荧光阳性细胞比例。 i．4统计学方法 采用SPSS 13．0统计软件进行分析。数据以均数±标准羞(孑±S)表示，采用方差分析或t检验，P O．05为有统计学意义。 2．结果 三组大鼠实验期间未出现死亡及下肢缺血坏死情况。 2．1酶学 正常对照组各指标在各时点无显著差异：中药组和模型组术前与对照组比较，也无显著差异。术后 表1 三组不同时点外周血AST(U／L．i±S) ★与模型组比较，P0．05 表3三组不同时点外周ⅡiLLDH(U／L，牙±S) -k与模型组比较，P0．05 表4三组不同时点外周血LBDH(U／L，牙±S) -k与模型组比较，P0．05 2．2 CD34+、VEGFR2+测定 A组仍维持较高水平，与B组比较有显著差异(P0．05)。见表5。 表5三组小同时点外周血CD34+、VEGFR2+(％．牙±S)