五种黄酮、皂苷类中药促心梗后大鼠缺血心肌血管新生作用和对相关生长因子表达影响的比较研究.pdfVIP

·粥· 第六次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 019 五种黄酮、皂苷类中药促心梗后大鼠缺血心肌血管 新生作用及对相关生长因子表达影响的比较研究 王振涛1韩丽华1朱明军2曹生海1张淑娟1 本研究对五种常用治疗冠心病(CHD)的黄酮、皂苷类中药三七总皂苷、川芎嗪注射液、丹参注射 液、葛根素注射液、醋柳黄酮促MI后大鼠缺血心肌血管新生作用进行比较，并通过观察其对相关生 长因子蛋白表达水平的变化探讨促血管新生的分子机制。 1材料与方法 1．1实验材料 1．1．1实验用药三七总皂苷粉：昆明圣火制药有限责任公司提供，批号把三七总皂 苷粉溶于无菌蒸馏水中，每毫升含三七总皂苷40mg；麝香保心丸：上海和黄药业有限公司生产，批 号：A040214，把麝香保心丸粉碎后溶于无菌蒸馏水中，每毫升含麝香保心丸3mg；丹参注射液：上 海第一生化药业有限公司生产，批号：031001；葛根素注射液：北京协和药厂生产，批号：031106； 川芎嗪注射液：北京市永康药业有限公司生产，批号醋柳黄酮片(心达康片)：四川雅 达药业股份有限公司生产，批号：030204，把醋柳黄酮片粉碎后溶于无菌蒸馏水中，每毫升含醋柳 黄酮1．25mg。 1．1．2实验试剂小鼠抗大鼠CD34单克隆抗体，购白美国Santa公司，生物素化二抗、三抗、非免 RabbitSP 有限责任公司，SP-9001 Kit购自北京中杉金桥生物技术有限公司；DAB显色试剂盒购自 北京中山公司。 1．1．3实验器材小动物呼吸机(江西特力麻醉呼吸设备公司，型号TKR一200C)；显微镜(日本 图象分析系统(日本Sony公司，型号SSC-DCl8P)。 号：410116)，参照文献方法，l％戊巴比妥钠腹腔注射(35mg／kg)麻醉，背位固定，行气管插管术， 连接小动物呼吸机，人工呼吸，开胸结扎左冠脉根部，以即刻心脏表面颜色变化和术后心电图I、 aVL导联ST段显著抬高显示造模成功，缝合胸壁，观察大鼠生理状态平稳后，停止人工呼吸，术后 注射青霉素3天预防感染。成活大鼠随机分为川芎嗪组、三七总皂苷组、丹参注射液组、葛根素组、 醋柳黄酮组、麝香保心丸组、模型组，假手术组手术方法同上，但在冠状动脉下穿线后打一松结。 1．3治疗方法造模后24小时内开始药物干预，每天一次给药。假手术组腹腔注射生理盐水 模型组管饲与治疗组同等容积的生理盐水lOml／kg／d；川芎嗪组腹腔注射川芎嗪注射液20mg／kg／d； 丹参注射液组腹腔注射丹参注射液0．59／kg／d；葛根素组腹腔注射葛根素注射液0．259／kg／d；醋柳 黄酮组管饲醋柳黄酮片12．5mg／kg／d。6周后处死动物。 1．4心肌取材麻醉大鼠后取出心脏，剪去主动脉弓、右心室、心房、心耳等，在乳头肌横切面切 取心肌组织(包括心梗区、移行区、健存区)，10％中性缓冲福尔马林液固定，石蜡包埋，制备厚4 第六次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 ·59· lIm组织切片。 1．5观察指标 1．5．1一般组织形态学观察切片脱腊，二甲苯透明，HE染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，树胶 封固，光镜观察。 1．5．2大鼠MI边缘区心肌MvC、MvD的测定用免疫组织化学法染色组织切片。一抗的工作浓度为 1：100。染色后血管内皮细胞被染成黄、棕色。微血管判断标准：按参考文献方法妲3，不以红细胞的 出现来确定是否为血管，也不以是否出现管腔来计数血管，凡染成棕黄色单个内皮细胞或内皮细胞 簇均作为一个血管计数，凡管腔大于8个红细胞大小、带有较厚肌层血管区域的血管均不计数。具 体方法为：先在40X视野下找到MI边缘区，然后在400X视野下进行大鼠MI边缘区微血管计数， 每张切片随机选取5个视野，计数每个视野的Mvc，取其均值作为本例大鼠的^l、，c值，因MvD以毛 细血管个数／视野表示，故每例大鼠的Mvc值即为该大鼠的MvD值。 PDGF—B和IGF—l蛋白的表达以细胞内出现棕黄色颗粒沉着为阳性反应。用病理图象分析系统计算 MI边缘区心肌每lOOX视野中平均灰度值。每张切片随机测定6个视野，取其均值作为该大鼠的灰 度值。 1．6统计学方法数据用SPSSll。0For Windows统计分析软件处理，计算所有数据以均数±标准差 (i±s)表示，组间比较采用单因