单纯疱疹病毒2型糖蛋白G基因克隆和B细胞抗原表位分析.pdfVIP

中南地区皮肤性病学术会议论文集 单纯疱疹病毒2型糖蛋白G基因克隆及 B细胞抗原表位分析 王茜 曾抗 孙乐栋周再高 刘凤岩 广州南方医科南方医院皮肤科，广东 广州 510515 【摘要】目的：克隆单纯疱疹病毒2型(HSV一2)糖蛋白G一2全长并对糖蛋白 G一2进行B细胞抗原表位预测。方法：用PcR法扩增HSV一2的gG一2基因，连接 到pGEM—T载体，转化大肠杆菌DH5a株后测序。 利用Lasergene、ClustalX等软件，将基因序列翻译成氨基酸序列后进行B细胞抗 原表位预测。结果：完成单纯疱疹病毒2型(HSV02)糖蛋白G一2全长克隆。通过B 细胞抗原表位分析预测，发现HSV一1的gG一1基因和HSV一2的gG一2基因在氨 基端的同源性很低。gG一2蛋白在“独特区”存在抗原指数非常强的抗原表位，适合用 于单纯疱疹病毒的分型以及疫苗的研究。结论：为单纯疤疹病毒感染的诊断试剂的 研发，抗单纯疱疹病毒疫苗研究寻找更好的靶位点提供研究材料和参考。 【关键词】单纯疱疹病毒2型；包膜糖蛋白G一2；基因克隆；抗原表位 单纯疱疹病毒(HSV)是引起人类病毒性疾病中常见的病毒之一，可分为HSV一1和HSV一2 两种血清型。HSV一2型主要感染外生殖器和躯干下部皮肤，引起生殖器疱疹、新生儿疱疹。目 前认为与生殖器恶性肿瘤相关，并增加了AIDS的感染机会【11。HSV一2病毒颗粒中有至少11种 胞膜糖蛋白，其中gG一2为型特异性抗原1li。gG一2在单纯疱疹2型病毒诊断、分型、疫苗研究 中有举足轻重的地位。本研究对HSV一2的gG一2基因进行克隆，并利用生物信息学软件对 gG一2基因进行B细胞抗原表位分析，为以ga一2蛋白作为靶区域的诊断试剂和疫苗研究打下 基础。 1、材料与方法 1．1病毒株HSV一2病毒株由本课题组在广东地区单纯疱疹感染病人中分离培养并保存 于Vero细胞。DH5Q细胞由本实验室保存。 dNTP(TaKaRa公司)，pGEM—T载体(Promega公司) PrimerSelect 限公司合成)。 1．4DNA提取采用DNAzsol—E(申能博彩公司)从HSV一2病毒株中提取DNA。 1．5 dNTPs39l、10一PCR 中南地区皮肤性病学术会议论文集 16．59l，总体积309l。反应 72一C 8min，40C保存。 1．6基因克隆使用申能博采公司DNA纯化试剂盒回收PCR产物，将回收产物与pGEM—T 载体连接，4。C放置12小时。将重组载体转化DH5Q感受态细胞，于氨苄青霉素抗性固体LB培 养基上37℃培养16小时，利用X—Gal和IPTG筛选阳性重组克隆。 1．7克隆鉴定获得的阳性克隆菌分别经PCR和双酶切初步鉴定，送TaKaRa公司测序。 HSV一1病毒gG一1基因进行B细胞抗原表位分析，并比较这两型单纯疱疹病毒糖蛋白G之间 的异同。 2结果 2．1HSV一2病毒gG一2基因扩增结果 从确诊生殖器疱疹病毒感染的病人分泌物中提取DNA，用设计的引物进行RT—PCR，经7％ 琼脂糖凝胶电泳可见一约2191bp的片段，与HSV一2标准株的gG一2基因大小一致(见图1)。 图1PCR法扩增．HSV一29G一2基因 Fig．重TheamplifiedgG一29eneofHSV一2isolate M：DNAMarker 1：the fromHSV一2 DLl5000；Lane isolate；Lane2： amplificationofgG一2gene the 3：DNAMarkerDL2000 purifiedamplificationofgG一29eneLane 将上述PCR产物纯化回收后，与pGEM—T载体连接，转化DH5Q感受态细胞，利用蓝白 斑菌落筛选阳性重组克隆。对阳性克隆质粒进行PCR和双酶切初步鉴定，PCR产物的琼脂糖凝 胶电泳条带人小约