广佛手茎尖微嫁接技术的研究.pdfVIP

广佛手茎尖微嫁接技术研究 贺红张桂芳林小桦徐鸿华 (广州中医药大学，广东广州510405) 摘要 目的：探讨广佛手茎尖微嫁接技术，为广佛手无病苗木的培育奠定基础。方法：黑暗 条件下培养柠檬实生苗用作砧木，以广佛手茎尖为接穗，采用倒“r字形法进行茎尖微嫁 接试验，并对影响嫁接成活率的因素进行研究．结果：成功获得了广佛手茎尖微嫁接苗，并 优化了微嫁接的条件：选取苗龄为14d的柠檬实生苗为砧木，嫁接成活率较高(60．ojI)；以 带2—3个叶原基的广佛手茎尖为接穗，效果较好；茎尖微嫁接后，切口外缠parafilm膜， 能明显提高成活率．结论：建立了广佛手茎尖微嫁接的方法，获得了嫁接成活苗． 关键词广佛手；茎尖微嫁接；成活率 Medica 佛手Citrus 以干燥果实入药，具有疏肝理气、和胃止痛的功效。广佛手在广东栽培历史悠久，为广东道 地药材，“十大广药”之一，随着市场需求的扩大及产业化生产的发展，对广佛手的产量和 质量提出了更高的要求，需要在栽培管理、病虫害防治及优质种苗的培育等方面做好工作。 由于广佛手通常以扦插和嫁接繁殖，长期的无性繁殖，病原体逐代传递和积累，造成植株长 势减弱、生活力下降、产量降低、品质变劣，严重威胁广佛手的生产。运用现代生物技术培 育无病原体苗，已成为广佛手生产中极为迫切的问题。茎尖微嫁接技术可以脱除病原体，这 项技术已在柑桔、沙田柚上获得成功，并逐步在生产上应用。本文探讨了广佛手茎尖微嫁接 的方法并对影响嫁接成活率的因素进行研究，为无病苗木的培育奠定基础。 l材料与方法 Eedica 1．1材料供试接穗广佛手[甜trus Lir#on(Linn．) 来源于广东省德庆县广佛手规范化种植(GAP)基地；砧木为柠檬[Citrus Bu珈．f．C．medicH．var．1imon Linn．]实生苗。 1．2方法 l。2．1砧木的培养取成熟柠檬果实中的种子，经表面消毒，剥去种皮，接于lllT培养基上， 在黑暗条件下培养，温度为26--28(℃)。 1．2．2接穗的准备采摘l～2cm大的广佛手嫩芽，切取0．5--一lcm茎尖，用蒸馏水冲洗几 次，75％酒精浸泡约30s，0．1％Hgcl：消毒6min，无菌水冲洗4．--5次后，在双目显微镜下剥 取茎尖，根据试验要求，分别取带2、4、6个旰原基或不带时原基仅有生长锤的茎尖作为接 穗。 1．2．3嫁接方法采用董高峰等人的方法，稍作改进。将摹尖接剑砧术的倒“T”字形切口 上，根据实验要求分为外缠parafilm膜和不缠膜，再将整株移入带滤纸桥的液体培养基中 进行培养。一般每个实验处理，嫁接的攀尖数为20个左右。 1．2．4培养条件以MT为基本培养基，附加6一BA 0．Img．L’。培养温度为26±1(℃)，每 4ll 天光照12h，光照强度为2000Lx。 2结果与分析 2．1广佛手茎尖微嫁接苗的获得 在无菌条件下，将砧木苗从培养瓶中移出。选择根茎部直径较大的健壮苗，切去子叶和 部分过长的根并去顶(留约2cm长)，用自制的解剖刀．在顶部切成倒“T”字形切口。随后， 将消毒过的嫩芽置于双目显微镜下。从外到内一片一片地剥去小叶，至带2—3个叶原基和 生长锤的茎尖(约0．2mm)，转接到砧木的倒T字形切口上。外缠parafilm膜，再将整株移 入带滤纸桥的液体培养基中。培养1—5d时茎尖大多保持绿色，7d左右。部分茎尖交褐、 死亡．另一些茎尖成活并开始生长．这时要及时除去砧木上长出的不定芽以减少对接德萌发 的影晌；14d左右，接穗开始萌生新叶，砧木也长出少量白色、幼嫩的新根：一个月左右， 茎尖微嫁接苗长出3—4片真叶，此时．将其从培养室中移出，在室内自然光下培养一周左 右，取出用蒸馏水洗净，置于5mg／LIBA溶液中浸泡24h后，单株移入混合土壤(50％的营 养土：50％细沙)的营养钵中，注意植株的保湿。移栽时应使根系紧密接触土壤，用1／2MT 培养液充分湿润土壤。两个月后，茎尖微嫁接成活苗可以长出10片左右新叶(图略)。 2．2砧木菌龄对嫁接成活率