参附注射液中特殊色谱成分辨析.pdfVIP

3．4方法应用 槲皮素、山萘酚、异鼠李素与细胞共孵育后，按样品处理方法进行。用高效液相检测细胞内的 药物浓度，并除以细胞的总蛋白量后进行比较，见表3。 表3不同时间Bcap37细胞内的药物浓度 Table3 concentrationin cellsindifferenttime Drug Bcap37 4讨论 本法选取甲醇、四氢呋喃及异丙醇作为分离三种银杏黄酮的有机相，当四氢呋喃与异丙醇的体 X-100用于裂 积比为3：4并用pH2．0的磷酸盐缓冲液做水相时，峰形和峰的分离度最佳’…。Triton 解细胞释放药物。 通常除去生物样品中的蛋白质的方法是在生物样品中加入有机溶剂、盐、酸和重金属离子，～ 可以使结合型的药物释放出来，便于测定药物的总浓度：二是可以得到比较干净的提取液和减少乳化 的形成，使提取顺利进行：三是消除对测定的干扰。1。本实验采用高氯酸作为蛋白沉淀试剂，沉淀效 果良好，可以充分除去样品中的蛋白质，而且可以使样品溶液酸化，有利与药物被有机相提取，提高 提取效率。 本测定方法灵敏准确，可用于检测槲皮素、山萘酚、异鼠李素经细胞吸收后的细胞内物浓度。 参附注射液中特殊色谱成分的辨析 王颖刘仲义周娟 (四川省药品检验所610036) 摘要：参附注射液是以红参、黑顺片为原料制成的中药注射剂，在指纹图谱的研究过程中，我们采用 新型的水性柱对注射剂中的水溶性成分进行分析，在研究过程中，发现色谱行为特殊的色谱峰，其峰 宽较正常色谱峰宽6倍以上，近似于凝胶色谱中测定分子量分布的色谱峰，我们针对该特殊色谱峰进 行了研究，采用混合型固相萃取柱对注射液中成分进行初步分类，用高效液相色谱对参附注射液及其 中间体进行分离，并借助三维色谱技术对色谱峰信息进行深入研究，并对其来源、产生条件、变化规 律进行跟踪分析。认为该特殊色谱峰与在吐温存在的情况下某些具有紫外吸收的物质产生类似聚合的 反应有关，并处于一种动态平衡状态。 参附注射液是以红参、黑顺片为原料制成的中药注射剂，为确保参附注射液的质量稳定、可控， 拟建立参附注射液的指纹图谱。为使注射剂中极性较大的成分得到较好的分离，我们使用水性色谱柱 1100；流动相：乙腈一水(5： 进行分离。色谱条件：参附注射液(批号031210)；仪器：Agillent 95)：色谱柱：Phenomenex Synergi，4u ．234— 35℃。直接进样得到的图谱中有一组难以分离的物质，这种物质色谱行为特殊，其峰宽是其相近保留 时间的正常色谱峰峰宽的6倍以上，见图lA，近似于凝胶色谱中测定分子量分布的色谱峰，并经实 验己排除色谱柱中残留物或系统峰的可能性，由三维色谱可知，此峰紫外吸收最大为254mn，在220nm 以下基本无紫外吸收，见图2A；而且，该色谱峰的蜂形和保留时间都时有变化，对指纹图谱的研究 构成一定干扰，我们针对该色谱峰进行了研究。 I．参附注射液成分的分类研究 为将该色谱峰定性，我们尝试采用固相萃取柱将注射液中的成分进行分类，实际采用的是阳离子 Oasis 交换型固相萃取柱(WatersMCX，1co)，设计将样品酸化，加到已活化的萃取柱上，用酸淋 洗，使碱性化合物结合在萃取柱上，再以甲醇将以非极性作用力保留的中性、酸性化合物洗脱下来， 而以离子作用力结合在萃取柱上的碱性化合物仍保留在萃取柱上，最后用碱性甲醇将碱性化合物洗 脱。 取各步骤收集液分别于80。C水浴蒸干，残渣溶解，注入色谱仪，与直接进样的色谱图进行比较， 各步骤收集液的色谱峰与直接进样的色谱峰难以找到直接的联系，该特殊峰在洗脱后的各部分收集液 中均未出现。 考虑到洗脱过程中加入的酸、碱可能对样品的稳定行造成影响，同法制取收集液，调节pH值至 中性后于80。C水浴蒸干，残渣溶解，注入色