活性指导下的鸡肝散提取物和其制剂的质量研究.pdfVIP

◎ 药用植物化学与中药有效成分分析研讨会论文集(上) 活性指导下的鸡肝散提取物及其制剂的质量研究 应景艳，麻佳蕾，徐亚萍，曾苏，王以，陈亚坤，姚彤炜奉 (浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室，杭州310058) 摘要：目的研究鸡肝散提取物及其制剂的体内外吸收、代谢作用特点，为新药质量控制提供科学依据． 方法将鸡肝散提取物分别与Caco．2细胞、鼠肝微粒体共孵育，测定鸡肝散提取物中主要成分木犀草素 菅和苷元的体外吸收转运和葡醛酸结合代谢活性。并与动物体内研究结果进行比较，建立以生物活性为 导向的鸡肝散制剂质量控制方法。结果鸡肝散提取物中的大多数成分能够透过Caco．2细胞单层进入基 底层(在基底层得到的色谱图与加入药物的色谱图相似度达到0．87)，其吸收机制主要以被动扩散和主 动转运方式，同时存在P．糖蛋白外排，但其水解物(苷元)在Caco．2细胞单层转运中不存在外排现象。 体内外代谢研究表明鸡肝散提取物中黄酮类成分主要以苷元形式吸收入血液而发挥作用，并迅速发生代 谢反应，其代谢产物主要为葡醛酸和硫酸结合物．根据体内外研究结果，确定苷元木犀草素含量为鸡肝 散提取物及其制剂的主要质量指标。结论利用体内外吸收、代谢研究技术建立了以生物活性成分为导 向的质量指标，为鸡肝散制剂质量标准的制订提供了科学依据。 关键词：鸡肝散；Caco．2细胞；葡醛酸转移酶；药代动力学 口服给药是中药最主要的给药途径之一。而小肠的生理结构适用于药物吸收；肝脏则是首过消除的 主要器官，肝细胞中含有各种外源物代谢酶。中药与天然药物能否通过口服发挥疗效，主要取决于药物 是否能透过肠道上皮细胞和与肝脏细胞发生化学反应，然后以活性形式进入血液运送到各个靶器官或靶 部位，与受体等结合产生生物效应。本研究利用本研究室建立的体外吸收代谢研究技术平台，研究鸡肝 散提取物及其制剂在Caco．2细胞、肝微粒体酶中的作用特点，并与动物体内研究结果进行比较，以生 物活性为导向建立鸡肝散制剂质量控制方法。、 实验方法 1仪器与试药 Agilent Electron 公司)，DU640核酸蛋白分析仪(贝克曼公司)，二氧化碳培养箱(ne咖o Corporation，美国)， 中药指纹图谱相似度计算软件1．002版(浙江大学药学院药物信息学研究所)，3p8／药动学软件(由中 国药理学会数学药理委员会编制)。鸡肝散提取物及其制剂(浙江大学药学院中药所和药帮所提供)： 木犀草素对照品(中国药品生物制品检定所)；Caco．2细胞、鼠肝微粒体(本研究室提供)：SD大鼠、 ICR小鼠(浙江大学动物中心提供)． 2体外吸收——Caco-2细胞跨膜转运试验 定时间后吸取供给池或接受池药液，进行分析测定，计算药物的透过系数P砩． 3鸡肝散提取物的体外一、二相代谢试验 ’通讯作者：EmaihyaotlrIJzju．edu．on；Fax／Tel：86-0571 通讯地址：杭州余杭塘路388号浙江大学紫金港校区药学院，邮编310058 药用植物化学与中药有效成分分析研讨会论文集(上) 孵育一定时间后用HCIO。终止反应，测定不同酶源中孵育液的色谱图，应用相似度软件计算色谱相似度， 测定主要成分木犀草素苷的剩余量，分析比较药物在不同来源药酶中的代谢活性。 4鸡肝散提取物的体内药动学研究 将鸡肝散提取物制成20mg．mLl的混悬液，以180mg．kg-1的剂量给鼠灌胃，采集给药后不同时间 的血、胃、肠、心、肝、肾等生物样品，经处理后用HPLC法测定活性成分木犀草素及其代谢物，并用 LC／MS法对代谢物进行分析鉴定。 5鸡肝散制剂的定性定量方法建立 精密称取鸡肝散提取物或片粉适量，加甲醇一水(1：1)混合溶液一定量，超声使溶解，并稀释至每 1 m1含提取物约1 mg的溶液，经O．45 (指纹图谱252啦)．采用亚硝酸钠．硝酸铝比色法测定总黄酮含量。 结果与讨论：口才≮—■pIJp匕 21 1体外吸收实验结梨h 应用建立的HPLC指纹图谱对Caco-2细