高效液相色谱测定白芥子β-谷甾醇地研究.pdfVIP

高效液相色谱测定白芥子p一谷街醇的研究 吴红京’‘段建平 ‘ (1*中国科学院福建物质结构研究所，福州350002,E-mail:whj@ms.fjirsm.ac.cn 2 福州大学测试中心，福州 350002) 0一谷M醇具有消炎、抗癌、降血脂、降胆固醇、滋肤养颜和抗氧化等多种生理功效，受 到医学界的普遍关注。p一谷幽醇在豆油、棉子油、玉米油及多种中药中均有存在，其主要来 源为豆科植物。关于i3一谷幽醇的鉴定和测定已有报道[1-4]，报道一般采用TLC.Uv，也有采 用HPLC来测定0谷·幽醇，但多采用含水的流动相来分离测定0-谷凿醇。本文则采用与之不 同的色谱条件来分离和测定白芥子中的p一谷幽醇，方法可靠，可为植物中提取p一谷幽醇的药 用研究提供参考数据。 关键词:高效液相色谱，p一谷M醉 1.实验部分 1.1仪器和主要试剂 岛津LC-4A高效液相色谱仪，SPD-2AS紫外分光光度检测器，C-R2AS 数据处理系统 旧本岛津)。真空式旋转蒸发仪 (上海嘉鹏科技有限公司)。 甲醉、乙睛 (国产色谱纯)，p一谷幽醇对照品 (纯度为60%,S工GAM)，其它试剂均为A.R 级。 1.2色谱分离条件 色谱柱:9BondapakC,g(3.9mmi.dx300mm,Waters);流动相:乙腊: 甲醇 (85/15 v/v);流速:1mUmin:检测波长:240nm;柱温:350C。 1.3样品的制各 称取干燥、粉碎的白芥子粉5公斤，装入索氏提取器内，乙醚萃取至油脂 提取干净，醚提取物加入10%KOH溶液皂化至澄清，非皂化物加水稀释后用乙醚萃取数次， 合并萃取液，用水洗至中性，回收乙醚，残留物加甲醇加热使之溶解，放冷后析出晶体，脱 色后即得到白色粉末状p一谷幽醇粗制品。在粗制品中加入正丁醇，于650C溶解后，再放入 25*C温水浴中，并加入少量冷水搅拌2h，待晶形稳定后，保温过滤。重复上述操作条件，处 理干燥后的滤饼，得到0一谷L.醇精制品。 2.结果与讨论 2.1检测波长的选择 文献多介绍用205nm或254nm来检测0一谷幽醇，我们将配制好的 0一谷凿醇对照品溶液以甲醇为空白，在Uv-1100紫外/可见分光光度计上进行波长扫描 (200nm-400nm)，发现0一谷幽醇在240nm处有最大吸收峰，因此选择240nm作为检测波长。 2.2HPLC分离条件的选择 用几种反相色谱柱分别以甲醇/水、乙腊/0.2%HAC、乙睛/甲 醇为流动相，试验分离了白芥子0一谷幽醉提取物样品，结果表明:在BondapakC,e(3.9mm i.dX300mm,Water)柱上，采用乙睛/甲醇 (85/15v/v)为流动相分离效果较好，在选定的 分离条件下，0一谷幽醇与提取物中其它杂质得到效好的分离 (图省)。实验中还发现，提取 442 的日一谷幽醇试样一旦与水混合，立刻产生沉淀，因此最好不要采用含水的流动相，以免欲测 物与水混合，在柱上产生沉淀，不但影响分离，还会引起高柱压，损坏色谱柱。 2.3标准曲线和检测限 将用甲醇配制成lmg/mL的0一谷幽醇对照品标准溶液，稀释成不同 浓度的标准系列，分别取不同浓度的标准溶液进样，重复5次，测得峰面积，以峰面积均值 与浓度作图，绘制标准曲线，通过回归计算，求得回归方程Y二67.53十3.7569X103X，相 关系数r二0.9995，测得0一谷幽醇最小检测限在微克级。 2.4样品测定 称取同一编号提取样品2份，分别置于小瓶中，加入定量的甲醇 ，盖紧瓶 盖，放置约60℃水浴中微加热，待样品完全溶解后，稍冷，立即用0.45Nm滤膜过滤，滤液 用温水保温，待仪器稳定后进行HPLC测定，采用时间窗法定性，外标法定量。 2.5方法精密度 不同编号的样品各取5份，经处理后进行HPLC测定，批内(n=5)测定 相对标准偏差为0.26%0.53%0 2.6分析结果 用本法分别测定了白芥子0一谷幽醇的醚提取物、0一谷幽醇粗制品和精制品， 结果见表to 表1白芥子0一谷幽醇的分析结果 样 品 形 态 得 率 (%)* 含 量 (%) 醚提取物 黄色油状物 24.05 0.13 p一谷幽醇粗制品 白色粉末状结晶