草生欧文氏菌（E.herbicola）休止细胞代谢特性和固定化的研究.pdfVIP

第二届全国发酵工程学术讨论会论文集1998 草生欧文氏茵(E．herbicoIa)休止细胞 代谢特性及固定化的研究 吉爱国 高培基陈扬 山末太擎t生*址术田幸，^宴叠尘．眷南250100’ ■薹 本论文基于细曹由葡萄糖台威2．酮基·古龙醺的2．5-=翻纂n葡蕾慧馥造轻，设18个样本 用谢寓株止鲡臆蓉统地研宄丁蕈生歇文岳蕾(Erwbda抽f晰ljl对蕾尊慧、蕾茸I皓和∞曹董艟内酗 锋不弼庶钧的代谢特性．采用翼乙烯茸㈣A卜*眷蕾钙包堰洁栅鲁固定化龋臆．研究了草生戢文氏 茸固定化细胞的有关性质．结曩表明谈蕾株休止细艟能优先剃用葡萄糖蘑和舶萄糖酸内醢为产酸底 钳台成2．5-DKO，并以，％的苴娠度为倪．固定化细胞的使用礁定性和贮存甚定性均比潞离细胞有孵 蔓增加．而且固定化细胞对懈值右较宣的适应箍圈． 关奠诃草生欧文氏曹。代滔，2s-=翻基-m葡萄培酸 实现这个转化过程的酶是问质酶．包括葡揭糖脱氢酶(ECl．1．99．17)、葡萄糖酸脱氢酶，2一 酮基葡萄糖酸脱氢酶．葡萄糖脱氢酶健化葡萄糖脱氢氧化生成葡萄糖酸．然后经葡萄糖酸脱 氢酶将葡曹糖馥转化为2一酮基一p葡萄糖馥．最后由2一翻基葡一培墩脱氢酶氧化2一舅基一驴 葡萄箝酸生成25·二爵基·n葡萄糖馥．据Wakt“k^…报道，葡萄糖和葡暂糖馥都可以被 菌用来台成25·二酮基-D‘葡萄糖酸．我们感兴趣的是草生欧文氏葫能否直接利用葡萄塘酸合 成2．5·二嗣基·D·葡聋糖酸；如果可以．当铀萄糖和葡麓糖酸同时存在时．革生欧文氏菌优先 利用哪一种底暂来合威2．5．DKG．奉论文鲍主要工作星利用草生歇文氏奠的琳止细胞研究草 生欧文氏菌在2．5-DKG台成过程中对确掏糖和葡掏穗礅代谢特性、细胞的固定化方法以及同 定化细胞的有关性质． 1 材料和方法 t．1■种和试剂 草生欧文氏曹(ErwiaiaherbicolaATCCl62研，购自美田典型菌种收瓤馆． 葡蕾糖．葡萄糖瞳、衙崎糖政内髓等化学试剂均为分析纯． 1．2方法 1．2．1休止绸臆的耐鲁：收获液体培养l，小时的蕾体细胞用适量的生理盐水洗涤3次，用 通量的生理盐水悬浮溃，放置冰箱中鲁用． 1．2．2缅胞固定化方法…： los搴乙烯醇和19海藻酸钠加^100ml水，灭菌后冷却至室温，取20rnl加入休止细腿 卷渡备吐混匀后滴^CaCl2溶液中成型．放置过戎。加入交联剂进一步交联l小时，用水洗 至中性．迂当缓冲藏浸撞，鲁用． 条件下反应，严格无曹操作． ，2．4 2．-0KG的测定方法II： 120mbt 1 在试管中加入1．0ml适当稀释柏反应披．依欢加入1．0nd CaCl2．O．55ml5N 一3，q一 吉爱国等： 草生匿J【文氏菌EI；erblcola)体止细胞fE谢特性及周定化的研究 N地OH和06叫,IN哪棍匀，50℃水浴12分钟，测量460am波长的光吸收值． 1．2．5日I∞o∞含量的捌定tll： 用EIN$还原塘法做标准曲线．取稀释泣9．m1．加入2mlD咐3．煮沸10lnin．定容至15咖． 测OD550光吸收值．在标准曲线上鸯得稀释液浓度．乘以稀释倍数即祷G№浓度． 2结果和讨论 2．■一■在产酸反盅中的科用 在以O、O+G^．O+OL为底物的反应中．每二十四小时取样分柝葡萄糖的古量．结果 如图l所示： 50 萋。4。0 l： O O 24 48 12 96 1幻 Time‘『．) 圈l葡萄麓的消耗时问曲蟪 1 FlgtLrcThne∞ufof西uco∞c,omttmption 由图可见葡藉糖的含