层析法纯化牛血清蛋白地研究.pdfVIP

层析法纯化牛血清蛋白的研究 匡春香范圣第李光浩权春善张立莹 6600) (大连民族学院生化工程研究所，国家民委生物化工重点实验室 大连1l 摘要牛血清蛋白(BSA)经过纯化除击核酸醇后，可作为限制性内切酶和修饰酶纯化和稀 A-25 释时的稳定剂．本文以市售BSA为原料．经Hoparin—SepharoseCL-6B和DEAE一$ephadex 层折纯化后，所得的BSA经核酸酶检测和$DS检测，表明己达到分子生物学级要求． 关键词牛血清蛋白纯化层析 Serum 牛血清蛋白(Bovine 60％。在限制性内切酶和修饰酶的纯化和保存中，口sA常作为稳定剂使用，但对其质量要求较 高，即不能含有核酸酶等杂酶¨”。闫内80年代，有以牛血为原料提取BSA的报道‘“．其进一 步的纯化方法则研究很少，大多采用对其进行乙酰位使杂酶失活的方法。本文以市售BSA为原 料，利用Heparin-Seplmrose 得到了分子生物学级的BSA．． 1 q 1材料与方法 、 5 1．1材料 产L L℃然L 0缓用 1．2．3 A-25层析 ml DEAE-Sephadex A-25悬浮于180TE缓冲液， 取lO～lSg DEAI§-Sephadex 煮沸3h，冷却、脱气、装柱(中2．f×10cm)。小心加样，然后用TE缓冲液淋洗，测定上样 流出液和淋洗液中的OD。rim和o‰rim，合并}样流出液和淋洗液，待检测核酸酶合格后， ’ 进行透析。 1)时，取出，加 OD2¨对尹BSA，10Dm=1．67p-g，j 浓缩，待BSA浓度稍大于40mg／ml(甲24 入等体积的甘油，使之浓度达到50嘣。 ? 2结果与讨论 2．1层析纯化 CL一6B亲和介质是必要的和有效的，因为 在BSA的纯化过程中，选择Heparin-Sepharose CL．6B能够选择性地吸附核酸酶蛋自。层析后，经核酸酶、SDS检测， Heparin．Sepharose A-25柱层 DNA电泳图谱上无明显杂带，发现己去除了DNA核酸酶；而再经DEAE．Sephadex 析后，可彻底去除了RNA核酸酶。 2．2蛋白质0D值及收率 生望 堡塑鱼! 望唑。 些空丛 BSA粗粉溶解 165 9454 100 237 7904 83．6 Heparin—SepharoseCL-68 DEE-SephadexA-25312 5400 57．1 透析