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生物学综合实验模块二 植物生理学大实验 实验二 还原糖含量的测定 目的与要求 通过本实验，掌握碱性铜试剂定量测定微量还原糖的方法，了解测定原理，并测定苹果中还原糖的含量。糖类是植物体内的主要能源，其含量可高达植物干重的80%以上。因此，在科学研究与生产实践中，常需进行糖的定量测定。 原理 糖是多羟醛（或多羟酮）化合物，多糖和寡糖等都可以经酸或酶水解生成还原糖。还原糖是指糖分子中有自由的醛基或半缩醛羟基或酮基的糖，它们具有还原的性质。还原糖在碱性溶液中，加热后能定量地将二价铜[Cu (OH)2]还原成一价铜（Cu2O），即形成砖红色的氧化亚铜的沉淀。糖本身则被氧化形成酸。氧化亚铜的量可以用碘量法测定。 原理 测定时所发生的一系列反应如下： 2NaOH + CuSO4 → Na2SO4 + Cu (OH)2 Cu (OH)2 + 酒石酸钾钠 → 二价铜离子络合物+ H2O 还原糖 + 二价铜离子络合物 → 糖酸 + Cu2O KIO3 + 5KI +3H2SO4 → 3I2 + 3K2SO4 + 3H2O Cu2O + H2SO4 → Cu2SO4+H2O Cu2SO4 + I2 + K2SO4 → 2CuSO4 + 2KI 2Na2S2O3+I2 → 2NaI + Na2S4O6 材料及设备 一、材料 苹果。取若干苹果切开切碎，随机取材，2克/份，共3份。 二、仪器 大试管（25×250毫米） 吸量管 棕色试剂瓶 锥形瓶 玻璃搅棒 水浴锅 回流装置 50毫升酸式滴定管 容量瓶 细口试剂瓶 烧杯 恒温水浴 分析天平 试剂 碱性铜试剂的配制 称酒石酸钾钠6克，溶于约50毫升蒸馏水中；称无水 碳酸钠10克，研成细粉，溶于约100毫升热蒸馏水中；称 取碳酸氢钠12.5克，溶于约100毫升水中，可加热促进溶 解。待全部溶解后，将上述三种溶液混合均匀。另外称 取结晶硫酸铜（CuSO4·5H2O）3.25克，研成细粉，溶于 约50毫升蒸馏水中。完全溶解后，在搅拌下将它加入上 述混合液中。为防止沉淀可在沸水浴上加热10分钟。称 取碘酸钾（KIO3）0.4克（要准确到0.01克），草酸钾9 克，溶于约100毫升蒸馏水中，完全溶解后，加入到上述 混合液中，定容到500毫升。 试剂 5%碘化钾（KI）溶液100毫升。 0.005N硫代硫酸钠（Na2S2O3） 0.0050N重铬酸钾溶液 标准葡萄糖母液 6N的硫酸溶液 8N的盐酸溶液 1%淀粉溶液 80％乙醇 实验步骤 一、标定硫代硫酸钠溶液的浓度 取三个100毫升锥形瓶，各加入10毫升蒸馏水和0.1克碘化钾 （KI）。用移液管准确吸取10毫升0.0050N重铬酸钾溶液和1毫升8N 的盐酸，此时反应如下： K2Cr2O7 + 6KI + 14HCl → 8KCl + 2CrCl3 + 7H2O + 3I2 当碘化钾完全溶解后，立刻用待标定的硫代硫酸钠溶液进行滴 定，此时需不时摇动锥形瓶。当溶液滴至微黄色时，加入1-2滴1% 淀粉溶液，继续滴定，至蓝色突然消失。记录下硫代硫酸钠的用 量。三次滴定值相差不得超过0.1毫升，求出平均值。该溶液应每周 标定一次。 实验步骤 二、绘制葡萄糖的标准曲线 用吸量管准确吸取标准葡萄糖母液（10毫克/5毫升），分别配制成每5毫升 含糖0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0毫克的溶液，用50毫升容量瓶配制。 用吸量管准确吸取各种浓度的糖溶液5毫升（每种浓度做三份），放到大试 管内。取另一支吸量管，准确吸取5毫升碱性铜试剂，放到大试管内，空白用5 毫升蒸馏水代替糖溶液。混匀后，在沸水浴中加热15分钟，然后取出在冷水中 放3分钟，加热和冷却时，切勿摇动。 冷动后，用滴管沿壁加约1毫升5%碘化钾溶液（约20滴），再加入1毫升 6N的硫酸，并摇动试管，待反应停止后，立刻用标定好浓度的硫代硫酸钠溶液 滴定，边滴边用特制的玻棒搅动。当溶液褪至淡黄色时，加入2-3滴1%淀粉溶 液，使溶液呈蓝色。继续滴定，至蓝色突色消失，并在半分钟内不再变蓝。 记录硫代硫酸钠的用量。三次滴定的差值，不得超过0.1毫升。以空白滴定 值和糖溶液滴定值之差为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘成标准曲线。 实验步骤 三、检查标准曲