2011硕士研究生讲座高效液相色谱法.ppt

高效液相色谱法 药学院药物分析教研室 王巧 主要内容 简介 基本原理 仪器 应用 简介 色谱法的简称(又叫色层法,层析法),其本质是一种分离分析方法 常见的分离方法 蒸馏 离心 电泳 过滤 色谱(目前最有效的分离方法) 色谱法的发展 色谱法是一种现代的分离方法 1906年正式命名 20世纪30年代开始广泛研究和应用 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代 色谱法原理 色谱法的原理 是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解,分配,吸附等各种作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离。 两相中有一相是固定的,叫作固定相(Stationary Phase),有一相是流动的,称为流动相(Mobile Phase),流动相又叫洗脱剂,溶剂 相(Phase): 物理化学术语,特指在某一系统中,具有相同成分及相同物理、化学性质的均匀物质部分。各相之间有明显可分的界面 色谱法分离原理 液相色谱（色谱法分类） 按流动相的物态分: 气相色谱 (Gas Chromatography, GC) 用气体作为流动相(又叫载气) 液相色谱 (Liquid Chromatography, LC) 用液体作为流动相(又叫洗脱剂) 按固定相的形态分: 平面色谱 纸色谱 薄层色谱 柱色谱 高效液相色谱的产生 经典液相色谱 大直径的玻璃管柱，室温和常压下用液位差输送流动相，柱效低、时间长(常有几个小时)。 高效液相色谱（High performance Liquid Chromatography，HPLC） 填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,高阻力,高压，分析速度快。 主要分离类型与原理 一、 液-固吸附色谱 二、 液-液分配色谱liquid- liquid partition chromatography 三、 离子交换色谱(Ion-exchange chromatography) 四、 离子色谱(Ion chromatography) 五、 离子对色谱(Ion pair chromatography) 六、 空间排阻色谱 (steric exclusion chromatography) 七、 亲和色谱(AC)( Affinity chromatograph) 高效液相色谱仪 流程及主要部件 2.主要部件 (2) 进样装置 (3) 色谱柱 (4) 液相色谱检测器 B. 光电二极管阵列检测器(photo-diode array detector; PDAD) 光电二极管阵列检测器 C. 示差折光检测器（differential refractive index detector） d 蒸发光散射检测器(evaporative light detector;ELSD) 特点：通用性检测器，对各种物质均有响应。适用于挥发性低于流动相的组分，主要用于检测糖类、高级脂肪酸、磷脂、维生素、氨基酸、三酰甘油及甾体。 缺点：灵敏度较低，流动相中不能有缓冲盐。 E. 荧光检测器（fluorescence detector,FD） F. 电化学检测器（electochemical detector,ED） G：质谱检测器 LC-MS HPLC应用 应用领域 医药、食品、环保、生命科学、农业、化工等等 可分析化合物：80%以上的有机物如药品、氨基酸、蛋白质、核酸、烃、碳水化合物、多糖、高聚物、农药、抗生素、胆固醇、金属有机物等 药物分析 药品检验 质量控制 成品 中间体 鉴别、检查 含量测定 生物样品测定 血、尿、器官 、组织 中药材质量控制 定性 定量 指纹图谱技术 生物制品分析 抗脑衰胶囊HPLC指纹图谱分析 抗脑衰胶囊的HPLC指纹图谱 抗脑衰胶囊与白芍药材 抗脑衰胶囊与葛根药材 抗脑衰胶囊与制何首乌药材 抗脑衰胶囊与丹参药材 抗脑衰胶囊与黄芩药材 抗脑衰胶囊与菊花药材 同一厂家不同批次抗脑衰胶囊 不同厂家抗脑衰胶囊 离子对HPLC检测细胞内核苷酸库方法的建立及应用（中国协和医科大学中国医学科学院博士学位论文） 抗肿瘤药物绝大部分都是通过干预和调节DNA、RNA和/或它们的前体物(如dNTP、NTP等)的生物合成来发挥作用的。因此我们有必要建立一套快速稳定的分析方法来检测细胞内的NTP及dNTP水平。 评价细胞的能量代谢状况及DNA、RNA的生物合成状态。 而这些过程又与细胞周期的调节，病毒的感染及药物的作用有关，因此还可以将之用于研究一些具有抗肿瘤药理活性的化合物对DNA及RNA合成的干预调节作用。 另外还可以利用该方法将正常细胞与肿瘤细胞，不同类型的肿瘤细胞，甚至不同恶性程度、不同发