模板DNA的提取.pptVIP

实验报告要求 最后2学时进行实验课考试(20分) 开卷, 但不许抄袭其它同学试卷。 内容为两个实验： 实验目的、主要步骤、 结果（画图）、结果分析 4. 收卷时签名。 实验一、真核生物基因组DNA的 提取、电泳 六、预期结果 1 2 3 4 5 Marker 总DNA 如果是Smear带，说明所提基因组DNA的断裂现象严重。 思考题： 1. 本实验中所用到的各试剂的作用是什么? 氯仿, 乙醇, EDTA 2. DNA提取过程中应注意什么？ 由于基因组DNA的链很长，在实验中由于机械剪切力的作用，很难获得完整的DNA分子。常用的蛋白酶K、酚抽提法可获得100kb-150kb大小的DNA片断，可满足上述实验用途。 基因组DNA一般用于Southern杂交、构建DNA文库或用于PCR反应的模板。 实验结束后整理实验台, 值日生值日! 总结：提取基因组DNA的常见目的 实验仪器的使用及注意事项 ：（1：25~1：30） （1）吸头的安装要紧密：（2）吸取液体前，先打到第一挡：第一挡为实际读数体积，第二挡为帮助彻底打出液体，避免吸头内液体残留。 （3）将吸头插入液面下，不易过深或过浅：（4）缓慢松开拇指，吸取液体。（5）完全放开拇指后，吸头在液面下停留一下（约半秒钟）：（6）抬起加样器，观察吸头外壁上是否挂有液体。将外壁液体用容器口引流回容器： 尤其国产吸头容易沾附液体。 （7）将液体匀速打到目的容器内，加样器推到第二挡：速度不易过快。 （8）取下加样器头，放到废物盒内。如果需要吸取相同液体，吸头没有被其他试剂污染，可不换吸头。 按箭头所示，讲解离心机使用程序： 置50°C水浴50分钟讲解： 能溶解入10％一l5％的水分，因溶解的水分而损失部分DNA (酚不能抑制RNAase的活性, 溶解掉部分ploy(A)RNA) 实验第二部分（2：50~3：30） 实验前讲解： 1）本实验将用到的TE饱和重蒸苯酚、氯仿/异戊醇是有机试剂，比水的比重大，而DNA溶解在水里，达到分离DNA和杂质的目的； 2）介绍实验步骤； 3）强调注意事项（不能将加样器倒置，以防液体导流损坏加样器：尤其在抽取氯仿、苯酚等有机试剂时）。 1）? 模板DNA由于太大，非常容易受机械剪切而断裂，因此，为了得到完整的基因组DNA，尽量不要多次进行物理性操作，如用加样器反复吹打等，有时需要将加样器头尖剪断，以防由于太细造成基因组DNA通过狭小通道而断裂。 实验中到学生中间指导实验。 简单介绍一下真核细胞和真核细胞基因组，及我们今天实验的几部分内容（模板DNA的提取、电泳） 目的要求: 学习和掌握从动物组织中提取核酸的原理和操作技术 了解提取DNA/RNA的几种方法，原理和优缺点 学习测定DNA/RNA含量的基本原理及具体方法 要。 小图为教师做的予实验结果。由于在一个反应体系中有很多条基因组DNA，因此，理论上说，内切酶可以切割出相差一个碱基的DNA片段。 本次实验使用未经酶切的DNA样品电泳，由于片段大，在加样孔附近可看到一条很亮的DNA带。 置50°C水浴50分钟讲解：但以2价离子镁氯化镁的沉淀效率最高，还能提供Mg2+稳定DNA。 步骤8）时注意：完整基因组DNA有一个物理特性，就是比较粘，因此，如果基因组DNA黏度还在，一般情况下可以认为完整性尚可。 * * * 分子生物学实验 1、 欢迎大家参加分生实验的学习； 2、 学习分生实验的重要性； 3、 守纪律，听老师安排，穿白衣； 4、 每组做一份实验 4、 本课件禁止拷贝，同学们要作好记录; 5、 关于课间休息和上课时间 实验结束后主动整理实验台！ 实验一 基因组DNA的提取 实验二 PCR及琼脂糖凝胶电泳检测 实验三 RFLP 实验四 RNA提取 实验五 TA连接 实验六 转化 实验七 质粒的提取、酶切鉴定 实验课安排 1. 目的 DNA片段 质粒 TA载体 5.连接 重组质粒 目的 DNA 6.转化 无质粒的E.Coli 死亡 有质粒的E.Coli 存活 含抗生素培养基中生长 2. PCR 2-3min 平板筛选 实验课安排 质粒提取 7. 酶切 ?一、加样器的使用及注意事项 1、 用途 2、 如何使用？ 2.1 根据取样量，选择合适的加样器。 5ul、50ul、500ul，应选择哪个加样器? 顶部标有加样器的最大量程， 分别为：