孕妇血中胎儿DNA荧光定量PCR检测及与临产关系_临床医学论文.docVIP

孕妇血中胎儿DNA荧光定量PCR检测及与临产关系_临床医学论文 孕妇血中胎儿DNA荧光定量PCR检测及与临产关系_临床医学论文 【摘要】 目的 探讨晚孕期和临产后母血中胎儿DNA含量的变化及其临床意义。方法 运用实时荧光定量PCR技术分别检测孕28～42周以及临产时孕妇血浆中胎儿DNA的含量并进行比较。结果 孕28～31周、孕32～35周、孕36～42周和临产时的母血浆中胎儿DNA的平均含量比较差异有显著性(F=308.19,q=11.59～40.33,0.01)。结论 随着孕期的进展，母血中胎儿DNA含量的升高可能是分娩的诱因之一。 【关键词】 孕妇；胎儿;DNA;聚合酶链反应 　　［ABSTRACT］ObjectiveTo study the changes of content of fetal DNA in maternal plasma in late pregnancy and in labor, and explore their significance.MethodsThe content of fetal DNA in maternal plasma in 28-42 weeks of gestation and parturient period were detected by using realtime quantitative PCR technique.ResultsThe differences of mean content of fetal DNA in maternal plasma among 28-31week, 32-35week, and 36-42week gestation and parturient period were significant (F=308.19,q=11.59－40.33,0.01).ConclusionWith the progress of duration of pregnancy, the fetal DNA in maternal blood increases, which is, most likely, one of the inducements leading to delivery. ［KEY WORDS］Pregnant; Women fetus; DNA; Polymerase chain reaction 研究结果显示，孕妇血浆中存在胎儿DNA,且发现随着孕期的进展，胎儿DNA的含量也会相应升高[1]。但是对于母血中胎儿DNA含量的升高是否导致了临产的发生，它与临产及分娩是否有着密切的关系，文献报道较少。本研究旨在应用荧光定量PCR技术，检测母血中胎儿DNA含量的变化规律，从而在分子水平上探讨母血中胎儿DNA的变化及其与临产之间的关系。 　　1 对象与方法 　　1.1 对象 2006年10月～2007年4月，选择在潍坊市人民医院产科就诊的正常孕育男胎的孕妇40例，分为28～31周组、32～35周组、36～42周组、临产组。正常临产是指孕妇孕龄36周以上，阴道少量见红，或伴有规律性子宫收缩，或见阴道流水，不伴有任何妊娠并发症。对被研究对象进行定期随访，并征得病人的同意，等待产后确认胎儿的性别。同时，选取1例正常男性血浆和 1 例未孕、无妊娠史的女性血浆分别作为阳性和阴性对照。 　　1.2 方法 　　1.2.1 标本的准备 　　取各组孕妇外周血3 mL，用EDTA抗凝，12 000 r/min离心10 min，取血浆放在灭菌离心管内，再次3 000 r/min离心10 min，取上清于另一灭菌离心管中，-30 ℃保存。 　　1.2.2 血浆DNA的提取 　　采用Tiangen公司的微量DNA提取试剂盒，按照步骤及要求操作。所有步骤均由女性操作。 　　1.2.3 实时荧光定量PCR引物及探针的设计 　　采用美国ABI公司生产的Tagman荧光探针试剂盒，分别对Y染色体上的DYS14位点进行定量分析。DYS14片段大小为84 bp, DYS14引物上游序列: 5′； DYS14引物下游序列：5′； DYS14 探针序列: 5′GGAGAGGTGCTC3′。 　　1.2.4 实时荧光定量PCR检测 　　标准曲线的建立和结果计算：按照10倍梯度稀释标准品，进行PCR扩增。各个梯度之间循环阈值(Ct)相差3～4个循环。然后，给每个梯度的标准品输入相应的拷贝数，以拷贝数为横坐标，Ct 值为纵坐标，建立标准曲线，从标准曲线可以得出Ct值与拷贝数之间的转换关系，即利用待测标本的Ct值求出相应的DNA含量，此工作由Applied Biosystems 7500 Sequence Detector所