常见医院感染细菌耐消毒剂基因的研究.pdfVIP

全国消毒论文写作与新进展学术交流会暨全军消毒新标准与新技术培训班资料汇编 2013年7月·宁夏银J 常见医院感染细菌耐消毒剂基因研究 野丽莉1，郭建华2，孙利群2，王艳秋2，刘晓杰2 (1吉林省肿瘤医院检验科，长春130061；2吉林省卫生监测检验中心，长春130062) 摘要：目的了解临床分离的常见医院感染细菌中耐消毒剂qacEA-基因的携带情况。方法采用聚合酶 链式反应(PCR)的方法，分析20株临床分离多重耐药细菌(大肠杆菌8株、阴沟肠杆菌5株、肺炎克 雷伯菌2株、金黄色葡萄球菌2株、铜绿假单胞菌1株、鲍氏不动杆菌1株及产气肠杆菌1株)中qacE 厶』基因情况。结果20株常见医院感染多重耐药细菌中有7株携带qacEA_，基因。结论医院临床分离 的耐药细菌中存在消毒剂抗性基因qacEAJ，在实施日常消毒工作中应予以高度重视。 关键词：医院感染；耐消毒剂基因； qacEA』基因 近年来，有关医院感染常见分离细菌耐消毒剂基因的研究已经很多。据推测，携带有qac基因的菌 株在临床上可能增强其存活的几率，广泛的应用消毒剂可能导致耐抗生素及消毒剂的菌株的选择性生 长。为了解我院分离的20株医院感染分离细菌耐消毒基因qacEZ3』基因的携带情况，评价医院使用消 毒剂的情况，特作此研究。 1 资料与方法 1．1菌株来源、鉴定与耐药性 20株菌株分离自医院住院患者临床标本，分别为大肠杆菌8株、阴沟肠杆菌5株、肺炎克雷伯菌2 株、金黄色葡萄球菌2株、铜绿假单胞菌1株、鲍氏不动杆菌1株及产气肠杆菌1株。标准菌株为大肠 11639 埃希菌8099、肺炎克雷伯菌ATCC 采用法国生物一梅里埃API系统鉴定菌种，K—B法药敏实验。抗生素药敏结果见表1。 1．2菌株DNA制备 吸取250ul去离子水到1．5ml离心管内，用枪头刮取平皿培养物，放入离心管中，淹没。然后放 000r／min 入100℃水浴中10min，离心12 5min，吸取上清液移入另一新的O．5ml离心管，作为 基因检测模板液，置入一20℃冰箱备用。 1．3∞c必』基因检测 为PCR法。引物由生工生物工程(上海)有限公司合成。qacEA』扩增产物长300bp，引物P1：5一 TAGCGAGGGCTTT TCAG从T ACT从GC一3：P2：5一ATGCCGAACACCG一3。 25u ul，dNTP2u ul(10 1反应总体积的组成：10×PCR缓冲液2．5 l(2．5mmol／L)，引物各2．5 u u u ul mol／L)，无菌去离子水12．71，DNA模板2．5l，0．13 U／ul(TAI(ARA生 TaqDNA聚合酶5 Thermal 物工程公司)。应用LifeExpress 70℃，1 以后按95℃，lmin：48℃，45Sl min；共进行25个循环。最后延伸为72℃，5min。取 u PCR产物5l，在1％的琼脂糖凝胶上以100V电泳20 min， min，以EB溶液染色10min，水洗10 GelDoc 在BIO—RAP 2000凝胶成像系统检验结果。纯水为阴性对照。出现300bp的条带判断为阳性。 2结果 2．1抗生素敏感性 ．178． 全国消毒论文写作与新进展学术交流会暨全军消毒新标准与新技术培训班资料汇编 2013年7月·宁夏银J 表l20株临床分离医院感染常见细菌对20种抗生素药敏结果 2．2qacE．4