美托洛尔对豚鼠乳头肌细胞缺氧再灌注后跨膜电活动的影响.docVIP

美托洛尔对豚鼠乳头肌细胞缺氧再灌注后跨膜电活动的影响 吴文浩 路红梅 河北医科大学第二医院麻醉科 心肌缺血-再灌注可使心肌细胞动作电位发生改变，如动作电位时程（APD）、有效不应期（ERP）的缩短，振幅（APA）的降低，静息电位（RMP）的升高，动作电位0相最大除极速率（Vmax）的下降等，并因此可能导致严重的甚至致死性的室性心律失常发生[1]。心肌缺血再灌注心律失常发生机制已经成为目前重要的研究课题。已有研究表明，折返、自律性增强及触发活动[2，3]在缺氧-再灌注过程中扮演重要的角色。导致折返、自律性增强及触发活动的因素主要是在缺氧过程中代谢的改变以及再灌注过程中氧自由基[1] 、NO、1，4，5三磷酸肌醇（1NS(1,4,5)P3）所导致的再灌注损伤[5]和细胞内的Ca2+超负荷。 自六十年代应用β-受体阻滞剂以来，其在临床上已经得到广泛应用。选择性β1-受体阻滞剂美托洛尔，选择性作用于β1-受体，减少和避免了非选择性β-受体阻滞剂呼吸系统的副作用。美托洛尔已被广泛用于高血压、心绞痛、心律失常、充血性心力衰竭的治疗，在降低冠心病和脑卒中的发病法致死率，心肌梗塞的预防和治疗中发挥了一定作用。在心肌缺血再灌注过程中，美托洛尔对缺氧/再灌注心肌细胞动作电位有何影响，目前尚未定论，本实验采用传统的标准微电极技术，在模拟缺氧/再灌注状态下，本研究的目的在于探讨美托洛尔抗缺氧/再灌注心律失常（RIA）的作用及对豚鼠乳头肌细胞动作电位的影响，研究其在缺氧/再灌注过程中的应用价值。 材料与方法 一 试验仪器 德国HSE-309微电极放大器，放大倍数10倍。 日本KIKUSU I DSS6521示波器。 上海国泰电讯器材厂BC-1步进电机微操纵器。 采样卡，12BITS，转换时间25ns 计算机，PENTIUM133,32M内存，数据记录系统基于WINDOWS，采样率为12kHZ，最大连续记录数据量10M。 德国HSE PULLER-819玻璃微电极拉制器 苏州产CFP-4多功能心脏脉冲程控刺激仪 实验浴槽，恒温水浴及灌流设备。 显微镜 二、实验材料 有氧台氏液[9]： NaCL 137.0 mM,KCL 5.4mM, NaH2PO4 0.42mM NaHCO3 11.9mM, CaCL2 1.8 mM MgCL2 1.05 mM Glucose 5.5 mM 无氧台氏液[10]： NaCL 123.0 mM, KCL 10.0mM, NaH2PO4 0.9mM NaHCO3 6.0mM, CaCL2 2.5mM MgSO4 0.5 mM Sodium Lactate 20.0 mM 以3MKCL充灌的玻璃电极毛坯，直径1.2mm 美托洛尔：广州市医药工业研究所实验车间，批号三、实验方法 随机选择健康成年豚鼠25只，体重220~300g，雌雄不拘。用木棒击豚鼠头部致昏，迅速开胸取出心脏，用充以混合气（含O295%、CO2 5%）、pH值为7.40的台氏液冲净残余血液后，分离乳头肌标本（长3~4 mm,宽1~2 mm）,固定于浴槽内，持续以充混合气，用pH值为7.40的普通台氏液[成分（mM）糖5.5、NaCL 137、,KCL 5.4、NaH2PO4 0.42、NaHCO3 11.9、CaCL2 1.8 、MgCL2 1.05]灌流，灌流速率为3 ml/min, 浴槽内台氏液温度控制在37±0.5℃，同时用1 500 ms的起搏周期、2倍舒张期阈值的电压、脉宽2 ms的电刺激连续起搏豚鼠乳头肌。用已经清洁的微电极末毛坯现场拉制玻璃电极，并充满3M KCL，将玻璃微电极固定于步进器并连接纪录电极，将参考电极固定于浴槽内台氏液中，利用步进器将玻璃微电极插入乳头肌细胞，引出跨膜动作电位，信号经微电极放大器放大10倍后输出在示波器上显示，同时输出信号经采样卡引入计算机记录系统以备随时记录。 随机选取豚鼠乳头肌标本7份，引出正常稳定的动作电位，然后分别进行对照组及给药组实验。 1. 观察美托洛尔对豚鼠乳头肌正常情况下电生理特性的影响 标本在正常台氏液灌流30min ，记录基础起搏周期（S1S2）为500ms 的用药前及用药后30 min 时的各种电生理参数，ERP 按文献方法测定[10]（见图3） 2. 美托洛尔对乳头肌细胞再灌注性心律失常的影响 观察美托洛尔对缺氧/再灌注状态下乳头肌电生理特性的影响 将标本分为模型对照组和给药组。模型对照组标本在正常台氏液灌流槽中平衡60min后，用缺氧台氏液灌流10min 然后再用正常台氏液灌流30min . 给药组标本依次用正常台氏液和含有一定浓度的药物的正常台氏液溶液平衡灌流30min， 然后用含有相同浓度药物的缺氧和正常台氏液与模型对照组平行操作。