黑麦草高效丛生芽的发生及离体开花的初步研究.pdfVIP

100 - 106 　　　草 　业 　学 　报 　　　 第 14 卷 　第 6 期 12/ 2005 　　　A C TA PRA TA CUL TU RA E SIN ICA 　　　 Vol . 14 ,No . 6 黑麦草高效丛生芽的发生及离体开花的初步研究 姜素云 ,胡孝瑞 ,晁相蓉 ,杨爱芳 ( 山东大学生命科学学院 , 山东 济南 250 100) 摘要 : 以一年生和多年生黑麦草优良品种为材料 ,取无菌种子苗的茎尖生长点部分在加有不同浓度的 2 ,4D 和 6 BA 的 M S 诱导培养基上诱导丛生芽发生 ,然后在加有不同浓度 6BA 的增殖培养基上产生大量丛生芽 ,并长期继 代培养 。从丛生芽块上剥取单芽转移到生根培养基上诱导根的发生 ,生根植株移栽成活率达 100 % 。本试验建立 了一种诱导频率高 、增殖速度快 、试验周期短的黑麦草丛生芽离体培养体系 。在附加适宜浓度 6BA 和 ABA 的培 养基上丛生芽可直接分化出大量花序 ,40 d 后产生花序的芽块频率最高为 81 % 。进而研究了光照 、激素和继代培 养时间等因素对黑麦草离体开花的影响 。 关键词 :一年生黑麦草 ;多年生黑麦草 ;丛生芽 ;离体开花 中图分类号 :S543 . 6 　　文献标识码 :A 　　文章编号 (2005) 060 10007 ( ) ( ) 　黑麦草是禾本科黑麦草属植物 ,有一年生黑麦草 L ol i um m ul t if l or um 和多年生黑麦草 L . p eren ne 之分 。 多年生黑麦草又叫宿根黑麦草 ,一年生黑麦草又叫意大利黑麦草 ,原产于西南欧 、北非和亚洲西南 ,20 世纪 50 年 代作为优质牧草被引进 。黑麦草分蘖多 ,产量高 ,质地柔软 ,绿期长 ,是良好的绿色饲料 。另外 ,其根系发达 ,适生 性强 ,耐践踏 ,有耐盐碱潜力 ,能增加土壤有机质 ,改善土壤结构 ,防止水土流失 ,是很好的草坪草 。为适应黑麦草 育种工作的需要 ,保存和快速繁殖优质原始材料 , 黑麦草的离体培养和快速繁殖技术受到越来越多的重视 。 Greemer s Molenaar [ 1 ] 以未成熟花序为外植体 ,建立了多年生黑麦草的愈伤组织培养再生体系 ,获得了多年生和 一年生黑麦草的再生植株 。国内也有幼穗培养直接成苗的报道[2 ,3 ] 。但黑麦草愈伤组织诱导率低 ,在继代培养 过程中胚性容易丧失 ,再生植株易发生体细胞无性系变异[4 ] ,黑麦草遗传转化的受体通常为具有再生能力的愈伤 组织或悬浮培养细胞 。由于受体系统难以建立和植株再生能力差 ,至今只有几个实验室获得了转基因黑麦草植 株[ 5～11 ] ,很多实验室转化后未得到转基因植株[ 12～14 ] 。因此找到合适的受体系统对黑麦草细胞工程和基因工程研 究有重要意义 。本研究利用无菌种子苗茎尖为外植体 ,在附加适宜浓度的 6BA 和 2 ,4D 的培养基上诱导丛生 芽发生 ,在增殖培养基上继代培养 ,建立高效的黑麦草离体丛生芽培养体系 ,为黑麦草的遗传转化提供了良好的 受体系统 。并以此体系为基础 ,初步研究了影响黑麦草离体开花的因素及控制条件 。 1 　材料和方法 1 . 1 　材料 ( ) ( ) 一年生二倍体黑麦草海湾 gulf 和多年生四倍体黑麦草泰垂莱特 t et relit e ,种子来自美国俄勒冈州 。 1 . 2 　方法