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微生物限度检查法 Microbial Limit Test －法规视角 主要内容 微生物限度检查的定义和一般流程 各国药典限度检查的方法和标准 原辅料 制药用水 中间控制 成品 薄膜过滤法的优点和密理博的必威体育精装版薄膜过滤系统 中国药典2010版VS 2005版 微生物限度检查法的定义 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受 微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵 母菌数及控制菌检查。 －中国药典2010版 微生物限度检查法 计数检查－细菌数、霉菌数和酵母菌数，是一种定量的检查 控制菌检查－定性检查 微生物限度检查法的应用范围 控制菌检查 计数检查 原辅料 成品 制药用水 中间控制 环境监测 实验结果 成品释放 微生物限度检查法的一般流程 计数检查 步骤－取样 采用无菌取样工具，无菌操作取样品于取样袋或灭过菌的 容器中。 检验量 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml 或cm2）。 除另有规定外，一般供试品的检验量为10g 或10ml；化学膜 剂为 100cm2； 贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。 微生物限度检查的一般流程 计数检查 步骤二 供试液制备 称取定量的样品于无菌的稀释液中。一般制备1：10或1： 20 的供试液。 根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供 试液。供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。供 试液从制备至加入检验用培养基，不得超过 1 小时。 微生物限度检查的一般流程 计数检查 步骤三供试品检查 将供试液过滤，将滤膜转移到适宜的培养基上（薄膜过滤法） 或用适宜的培养基直接与定量的供试液混合，铺成平板（平板 法） 步骤四培养和计数 放入培养箱内在规定的温度下培养，培养时间结束后读数。 一般营养琼脂培养基用于细菌计数；玫瑰红钠琼脂培养基用于 霉菌及酵母菌计数；酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基用于酵母 菌计数。 微生物限度检查的一般流程 控制菌检查 取供试液10ml （相当于供试品1g、1ml、10cm2），直接或过 滤后接种至适宜的增菌液中，在35 ～37℃下培养，如果有微 生物生长，再在选择性培养基上进行划线分离，如在选择性培 养基上没有发现典型菌落的生长，判断未检出该控制菌，否则 还需做进一步的选择培养或用生化反应来最终确认。 限度检查的方法和标准 原辅料 有各论的原辅料品种 – 检查方法 • 依据各国药典相应的限度检查法章节 – 计数检查标准 • 在各论中有相应的标准 – 控制菌检查标准 • 在各论中有相应的标准 – 例子:乳糖 中国药典各论 微生物限度 取本品，依法检查（附录Ⅺ J），每1g供试品中细菌数不得过 1000 个，霉菌数不得过100个外，还不得检出大肠杆菌。 无相应各论的品种 – 检查方法 • 依据各国药典相应的限度检查法章节 – 计数检查标准 • 依据 欧洲药典 5.1.4 / 美国药典 1111 • 中国药典限度检查法规定： 原料及辅料 参照相应制剂的微生物限度标准执行。 – 控制菌检查标准 • 没有明确，一般可以参照制剂的控制菌检查要求。 限度检查的方法和标准 制药用水-特殊的原辅料 正文品种 附录 主要内容 中国药典1部