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内窥镜中检测HBV的PCR技术与ELISA方法比较 黄 杰 黄石市疾病预防控制中心 湖北黄石 435000 目的：比较PCR HBV-DNA和ELISA HBsAg两种检测方法在检测内窥镜中HBV的检测情况。方法:现场采集内窥镜各关键部位(镜身、孔道、活检钳)的样品207份，平均分成两份，按各自所用试剂盒的要求分别进行试验，比较两种试验的阳性检出率、一致性等试验评价指标。结果:PCR HBV-DNA阳检率为27.54%，ELISA HBsA阳检率为2.42%，经x2检验，x2=4.63 P=0.031，一致性检验，kappa=0.089 P=0.008，由此说明两种检验方法在内窥镜中痕量的HBV的检测过程中有显著性差异。 结论：PCR HBV-DNA对内窥镜中痕量的HBV的检测方法优于ELISA HbsAg方法。 随着人们对乙型肝炎病毒(HBV)的深入研究，对与血清中的HBV的检测方法也日臻完善，主要有基于免疫学ELISA的HBVM(乙肝病毒感染标志物)检测和基于分子生物学PCR的HBV-DNA(乙型肝炎病毒基因组)检测。两种方法各有优劣，PCR方法灵敏高，但仪器和操作要求较高，所用检测成本也较高;ELISA方法试验条件要求不高、方便、便宜，但对于痕量HBV的检测容易出现假阴性。本文旨在通过对内窥镜中痕量HBV的检测进行分析，确定黄石地区各医疗单位HBV污染内窥镜的调查时所应采用的最佳检测方法。具体如下: 1、材料与方法 1.1样品采集、处理:由黄石市疾病预防控制中心的专业监测人员在各医疗单位当天所使用的内窥镜检查完2/3数量的病人时按常规操作对全市各级医院内窥镜的镜身(含镜头)、活检钳、内镜孔道等主要部位进行采样:①内镜镜身、镜头表面:用浸有无菌中和剂(0.5%硫代硫酸钠+1.0%甘氨酸、1.0%吐温、0.1%卵磷脂的0.03mo1/LPBS，以下类同)的棉签，于表面100cm2反复涂抹10次，无菌操作条件下，将棉签采样部位剪入5ml含无菌中和剂试管中，振打80次，作为样液。②活检钳:无菌操作条件下，将活检钳直接放入1Oml含中和剂的无菌盐水试管中，开关活检钳瓣，振荡洗脱30秒，取出活检钳，作为样液。③内镜孔道:无菌操作条件下用无菌注射器吸取1Oml含无菌中和剂采样液，从活检钳孔口注入，用无菌的带塞试管在活检出口接收流出液，作为样液。 1.2乙型肝炎病毒检测:所得上清液应用PCR法检测HBV-DNA, HBV-PCR荧 光定量检测试剂盒为深圳匹基生物工程股份有限公司产品，所用仪器为Roche LightCycler实时荧光基因扩增仪(瑞士)。同份样品用ELISA法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)，ELISA试剂盒为上海科华生物工程技术公司产品。两种检测的操作方法及判断结果均严格按产品说明书进行。 1.3结果判断:ELISA检测的吸光度大于阳性对照的为阳性结果，PCR检测的 拷贝数大于1*103copies/ml为阳性结果。 2、结果与讨论 2.1内窥镜不同部位HBsAg与HBV-DNA的检测结果为207份样品中用PCR 方法检测出镜身阳性24份，阳性率为32.88%孔道15份，阳性率为25.42%活检钳18份，阳性率为24 %，HBV-DNA检测阳性率为27.54%;而用ELISA方法测出 镜身阳性1份，阳性率为1.37%孔道3份，阳性率为5.08%活检钳1份，阳性率 为1.33%，HBsAg检测阳性率为2.42%。内窥镜各部位的HBsAg与HBV-DNA污 染阳性率见表2.1，内窥镜各部位的HBsAg与HB V-DNA检测阳性的分布情况见表2.1。 HBV-DNA检测的阳性率明显高于HBsAg的检测阳性率。 表2.1内窥镜各部位的HBsAg与HBV-DNA污染阳性率(%) 表2.1 内窥镜各部位的HBsAg与HBV-DNA污染阳性率（%） 样品数量 HBsAg阳性 　 HBV-DNA阳性 份数 阳性率（%） 　 份数 阳性率（%） 73 1 1.37 24 32.88 59 3 5.08 15 25.42 75 1 1.33 18 24 207 5 2.42 　 57 27.54 2.2对于上述207份样品均采用了HBsAg与HBV-DNA两种检测试验，我们对 其结果的一致性进行了整理，整理结果见表2.2 表2.2 HBsAg与HBV-DNA检测结果 　 　 HBV-DNA试验 合计 　 　 阳性 阴性 HBsAg试验 阳性 4 1 5 阴性 54 149 202 合计 　 58 150 207 经x2检验