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人载脂蛋白apoAI作为肝靶向载体的研究 冯美卿蔡钦生黄海周佩(复旦大学药学院) 乙型肝炎，特别是慢性乙型肝炎的治疗是目前尚未解决的世界难题之一。全世界乙肝病毒携带者约 的慢性乙肝患者经10—30年可发展为肝硬化，约5％的患者经2040年会发展为肝癌。若与丙肝同时感染则 有30．40％会转变为肝癌。全球每年约有80万人死于HBV感染相关性疾病，占疾病死亡原因的第9位。因 此，有效治疗慢性乙肝、降低HBV感染率是我们的当务之急。慢性乙型肝炎的治疗主要采用抗病毒、免 疫调节、改善肝功能和抗肝纤维化等综合治疗，其中抗病毒治疗是最主要和关键的治疗措施。 从HBV在体内的复制过程可以看出，抗病毒治疗的基础应是抑制嗜肝DNA病毒复制，抑制复制可 减少模板cccDNA的形成，同时抑制感染细胞中靶抗原的表达，以缓解炎症应答。 从乙肝病毒作用机制可知，抗乙肝病毒药物不单要清除血液中的病毒，更重要的是要在肝细胞内长 期维持一定的有效药物浓度，持续阻断HBVDNA的合成，切断核I勾cccDNA的合成供应，从而有效治 疗乙型病毒性肝炎，防止复发。因此需要治疗药物具有肝脏靶向性，并且必须靶向到肝细胞内，提高治 疗效果，降低药物在其它组织器官中的浓度以避免长期用药带来毒副作用，因此肝靶向载体的研究在肝炎 及肝脏肿瘤药物研究中显得非常重要。 二十世纪80年代提出了脂蛋白作为药物载体，研究热点主要集中在低密度脂蛋白(LDL)，但LDL 作为药物载体还存在不少问题【l、21，且靶向性不理想。而高密度脂蛋白(HDL)是血浆内重要的脂蛋白， HDL主要由磷脂、胆固醇(酯)及载脂蛋白组成，近年来在肝细胞膜上发现了其特异性受体SR-BI[31， HDL与受体SR-BI结合，经内吞将携带的胆固醇释放至肝细胞进行代谢清除，可实现胆固醇的逆向转 果肝脏组织分布为75．9％，而血浆分布为13．5％，表明重组HDL载药系统有良好的肝靶向【4’5】。但重组 HDL至今未广泛应用，其主要原因是HDL的主要成分载脂蛋白分离困难。HDL的载脂蛋白中，载脂蛋 白AI(apoAI)约占70％，目前apoAI主要来源于血液分离纯化，由于血源紧张和血液污染，apoAl 安全性存在极大隐患。为了进一步研究apoAI，本课题组已利用Pichia 表达水平远高于其他表达系统，有望工业化，为重组HDL作为靶向载体奠定了基础。 阿昔洛韦为核苷类广谱抗病毒药物，其水溶性和脂溶性都不好，在体内生物利用度只有15％．这极 大地限制了它的应用。因此，为增加其脂溶性，制备了其前药—阿昔洛韦棕榈酸酯，本文以其为工具药， 与卵磷脂、载脂蛋白AI模拟体内HDL组成，制备rHDL．药物复合物，并研究其体外抗病毒活性和体内靶 向性。 1．材料与方法 ， 1．1脱氧胆酸钠法制各重组ItDL-药物复合物I_7l 卵磷H旨lOO mg与抗乙肝药物适量混合溶于有机溶剂5ml中，在30℃水浴中旋转减压蒸发，制成薄膜 5 后，以氮气吹尽残余，加入溶有适量脱氧胆酸钠的1／20PBS ml，ApoAI3ml(5mg／m1)，将薄膜溶解，充 分混匀后于24℃水浴中摇荡30min，测量该混合液的体积和那西肽浓度。最后将此混合液在1／20PBS缓 冲液200mL中透析，开始1h换1次透析液，2次后，4h换1次透析液，22h后结束透析收集复合物。 1．2反相蒸发法制备阿昔洛韦脂质体I川 PBS水溶液，在水浴中超声5min至形成单相体系，之后在旋转 入2ml浓度为20mg-ml1阿昔洛韦l／20 蒸发仪上减压蒸发至脂质体形成，然后吹氮气至醚味消失。 1．3复合物特性 239 、 1．3．1阿昔洛韦的含量测定191 ．． 件为：色谱分离柱为HumihonPRP，流速：1mL·minl，检测波长为313nm，流动相：乙晴一水一醋酸 390：410：3(v／v)，迸样量：20L，柱温为室温。 1．3．2阿昔洛韦棕榈酸酯含量测定【10】 室温