人β防御素3在肺癌细胞中表达研究.pdfVIP

全军生物医药博士后论坛学术论文集 人B防御素3在肺癌细胞中表达的研究 丁辉，张健鹏 (武警总医院，北京100039) 【摘要]为了解ImD3在正常肺组织扣肺癌组织中的表达差异，初步探讨hBD3在肺癌发生中的作用，我们采 用RT-PcR厦免疫组织化学的方法在不同的水平检利hBD3在正常肺组织和肺癌组织中的表述差异。在 mRNA和蛋白质水平均发现，¨D3在肺癌组织中较正常肺组织表选增强，推刺hBD3可能在肺癌的发生和发 展中起一定的作用。 [关键词】B防御素3；谤导表达；肺癌 内源性抗生素肽(抗菌肚)是近10年来在天然免疫肽分子研究方面所获得的重要进展之一…．是 机体为抵御外源性病原微生物的入侵而产生的一类小分子多肽，与传统的抗生素相比，具有相对分子质 量小，抗菌谱广，热稳定性好，抗菌机制独特等优点。这些抗菌肽大多具有广谱抗微生物活性，其靶微生 物包括细菌、真菌、螺旋体甚至病毒等，有的还具有可选择性杀伤肿瘤细胞的功能，故可能是解决微生物 耐药问题的最佳选择。防御素是抗苗肽的其中一类，它是由真核细胞基因编码的肽类抗菌分子，依据其 在基因和肽分子层面上的结构特征，防御素分为3类，即d、B和8-防御素”J。我们所研究的hBD3是13 防御素的一种。Haxder等”1从银屑病皮屑组织中发现了可以有效抵御革兰阳性以及革兰阴性菌的 hBD3，并采用金黄色葡萄球菌亲和柱层析法进行了分离纯化。从蛋白水平上首先发现了hBD3。B防 御素不仅在保护上皮细胞和黏膜免受感染起着屏障防御的作用，甚至可能在肿瘤的发生中具有一定的 作用。 1材料与方法 1．1材料与试剂 1．1．1 材料肺癌组织及正常肺组织均来自北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治所。 kbPlus 国Promega公司；MarkerIDNA标志物，1 DNA标志物，琼脂糖凝胶回收及质粒提取试剂盒均购 自北京天为时代科技有限公司。免疫组化通用型二步法检测试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公 司；hBD3抗体购自英国abeam公司。 1．2引物设计与合成 在GenBank中检索基因，设计引物序列，由北京奥科生物技术有限公司合成。引物序列如下：13一aC- GCGCCCCAGG GTCACGCACG tin上游引物：5’一GTGGG CACCA-3’，下游引物：5’-CTFCCITAAT ATITC-3 7，产物片段540 ACGT GAATrCTITCTl3CTIEGGCAGCATr，产物片段204 bp。 1．3实验方法 1 cm× 3．1逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从一70℃冰箱中取出肺组织(包括正常和肺癌)样本(2 [作者简介] 丁辉，男，主治医师，首都医科大学博士，现为武警总医院博士后，主要研究方向为呼吸系统疾病。g-mil：¨曲zs日b @163．一。 37· 2…0 5硼)，用Triwl一步法提取肺组织总RNA，并于260nm和280nm赴测定其吸光度(A)值， hBIY3 5 dT(浓度0ug／一) mRNA表达水平。总RNA中取3$rg进行RT—PCR，在30山体系中用O]igo dT0 5 和MMLV逆转录酶合成eDNA第一条链。反应体系为：总RNA 5“l，DEPC球16